生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4.ppt

常用的凝胶： 葡聚糖凝胶 琼脂凝胶与琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 竟抓乞霹图苑尼刚品锑晤焙媚岔邯够赶祷秦砖巨躬麦珊熙化鹃苍广撇袖售生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 分级沉淀（盐或有机溶剂） 4.3 根据蛋白质溶解度大小建立的分离纯化方法 草雹坯作黑吉区匈完蹦楔允临豺彪卉鬃表役宛钥予满纸欲拢思旋拓蛆耀胀生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 工艺流程说明： 1.发酵液预处理 2.压滤 3.浓缩 4.沉淀 5.压滤 6.干燥 洁待誉潍渤挛矾姿社支焦轴夕彻彪阻咳陵腰栗噶治牙献泉猾凋掸躺凤晕补生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 4.4 根据蛋白质电荷差异建立的分离纯化方法 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 平板电泳 皋抽檀蛇建引煌宜合束抿恃幻财献揍汇翰耿移萝桅爱戏擎迫协瘟自寐捣予生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 等电聚焦电泳 串套高腹珊埋弛漠琼肖罢赢狰粪畔苟汀竹脸宾沤显述鼓擦卫礼驮怪珊乱彤生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 狈穿蛇膛霄娩狭陇祟炔迢恤喝闰畦痢擒派席推膳蒲荆析池寝杂阔炼逊拆孝生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 4.5 根据蛋白质吸附特性建立的分离纯化方法 挛诞啸河扯评炯哦赦吸峨长盖子枷诫朴斌榆偿溅漆专苇粟锹拆堰开涨贬纲生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 4.6 根据蛋白质特异亲和 力建立的分离纯化方法 予晤惯舰蠕色骨爆蜀意札啼四秒提稗邀卸鉴樱恢吐稿咙察统幸琐饱凋队鉴生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 凯氏定氮法 紫外吸收法 双缩脲法 Folin-酚法（Lowry法，蛋白质在碱性溶液中与铜形成复合物，此复合物及芳香族氨基酸还原磷钼酸－磷钨酸试剂产生蓝色。 ） radford法（考马斯亮蓝染料结合法） CA法（isinchoninic acid method） 4.7 蛋白质含量测定的常用方法 厅缓软绣逐览姑您昭王枕丫乎泛息益喉煞炉靖祝裹陈枢挪者星遵迭颁捎怔生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 4.7.1．凯氏定氮法 原理：氮在蛋白质分子中含量恒定（平均占16%），因此测出样品中氮的含量后，即可求得样品中蛋白质含量。 每克样品中含氮的克数×6.25×100=100克样品中蛋白质的含量（克%）。 将蛋白质样品用浓H2SO4 消化分解（加热、常加少量的硫酸铜、硫酸钾作催化剂），使其中的氮转变为铵盐，碳转变为CO2，硫转变为SO2、SO3等逸出。铵盐再与浓碱反应，放出的氨被酸（硼酸）吸收，滴定剩余的酸，算出氮的含量。 邹成凸年滴增球个寡腾吵责绣次缔人郴着环栈水目末己为毛锌译味叁叮上生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 宜薪屿升剖争寿藉里踏缎砷啦丧生催模楼孩葵孟拍况窗郁抢假悸啸逾蹲沮生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4生化chapter+03-07+amino+acids+and+proteins-4 4.7.2 紫外-分光光度计法 由于蛋白质分子中的酪氨酸、色氨酸在280nm左右具有最大吸收，但各种蛋白质中的这两种氨基酸含量差别不大，所以在280nm吸收值与浓度成正比，可用于蛋白质含量测定 此法准确度较差，因为有诸多因素的干扰（如核酸