基因工程抗体.doc

基因工程抗体 [摘要]抗体在生物医学领域中的应用极为广泛,其制备技术经历了从多克隆抗血清、单克隆抗体到基因工程抗体等3个发展阶段。基因工程抗体是按人类设计所重新组装的新型抗体分子,可保留或增加天然抗体的特异性和主要生物学活性,去除或减少无关结构,从而可克服单克隆抗体在临床应用方面的缺陷。 关键词:　基因工程抗体；抗体 基因工程抗体,即应用基因工程技术将抗体的基因重组并克隆到表达载体中,在适当的宿主中表达并折叠成有功能的一种抗体分子。 一、基因工程抗体概述 基因工程抗体具有分子小、免疫原性低、可塑性强及成本低等优点。此技术的基本原理是[1],首先从杂交瘤或免疫脾细胞、外周血淋巴细胞等中提取mRNA,逆转录成cDNA,再经PCR分别扩增出抗体的重链及轻链基因,按一定的方式将两者连接克隆到表达载体中,并在适当的细胞(如大肠杆菌、CHO细胞、酵母细胞、植物细胞及昆虫细胞等)中表达并折叠成有功能的抗体分子,筛选出高表达的细胞株,再用亲和层析等手段纯化抗体片段。基因工程抗体技术的着眼点在于尽量减少鼠源成分,保留原有抗体的亲和力和特异性。借助于基因工程技术,既可以对完整抗体,又可以对抗体片段进行改造。 二、基因工程抗体类型 1.重组抗体片段 小分子抗体以表达抗体轻重链可变区基因为主,含或不含外源肽链的分子较小的抗体片段,以分子小、体内半衰期短、免疫原性低、可在原核细胞系统表达、易于基因工程操作等特点而倍受关注。主要包括单链抗体、双特异性抗体、二硫键抗体、抗体Fab段、单域抗体(single domain antibody,SDA)、三链抗体(triabody)、抗体F(ab)2等。目前研究较多的是单链抗体、双特异性抗体、二硫键抗体和抗体Fab段。 1.1单链抗体 单链抗体单链抗体是用基因工程方法将抗体重链和轻链可变区通过一段连接肽连接而成的重组蛋白,是保持了亲本抗体的抗原性和特异性的最小功能型抗体片段,具有分子小、免疫原性低、无Fc端、不易与具有Fc受体的靶细胞结合、对肿瘤组织的穿透力强等特点,可作为将药物、毒素、放射性核素、细胞因子导向肿瘤的有价值分子;还可以将单链抗体基因导向到肿瘤细胞,在肿瘤细胞中表达,干扰肿瘤细胞蛋白表达,这种抗体称为胞内抗体。 1.2双特异性单克隆抗体 双特异性单克隆抗体是通过化学偶联、细胞工程(双杂交瘤细胞)和基因工程方法制备的一种单克隆抗体的特殊类型。它有2个抗原结合位点,可分别结合2种不同的抗原表位,其中一个臂可与靶细胞表面的抗原结合,另一个臂则可与效应物(如药物、效应细胞等)结合,从而直接将效应物导向靶组织细胞。研究发现,这种靶向作用不受特异性受体和靶细胞上MHCⅠ类分子及其刺激分子参与等约束,且当肿瘤细胞不存在时,效应细胞不被激活。BsAb的制备方法有杂交瘤细胞融合技术、化学交联法和基因工程技术[2]等,现多采用基因工程方法制备。双特异性抗体在疾病的诊断治疗,特别在肿瘤治疗方面具有较大的临床应用潜力。杨介砖[3]等通过检测抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-I)的生物学活性,发现BHL-I能显著促进PBMC增殖和PBL对靶细胞的杀伤作用。Kornacker等用F(ab)2 Her2/neu×CD3双特异性抗体把CIK细胞运送到肿瘤靶细胞时可增强T细胞介导的抗肿瘤活性,同时还能增加CIK细胞的增殖和脱噬作用,有其不容忽视的优越性。BsAb介导的免疫效应细胞的肿瘤细胞杀伤作用已进行了临床前试验研究,部分还进行了Ⅰ期临床试验研究。BsAb介导的免疫效应细胞的抗肿瘤作用在乳腺癌的免疫治疗中是一项突破性进展。 1.3二硫键稳定抗体 二硫键稳定抗体是在单链抗体的基础上发展起来的一类新型基因工程抗体,它是将抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的各1个氨基酸残基突变为半胱氨酸,通过链间二硫键连接VH和VL可变区的抗体。通用的突变位点是重链的44位和轻链的100位或重链的105位和轻链的43位。dsFv最显著的优点是生化性质稳定,能够耐受环境条件的剧烈作用。 1.4 Fab片段 Fab片段由重链Fd段与一条完整的轻链组成,二者通过1个链间二硫键连接,形成异二聚体,仅一个抗原结合位点。这种小分子抗体具有抗体的活性,而大小仅为完整IgG的1/3,分子小,穿透力强,免疫原性低,可与多种药物及放射性同位素偶联,多用作导向药物的载体和显影。但其主要在原核细胞内表达,折叠性有待解决;且仅有1个抗原结合位点,与抗原的亲和力低;在肿瘤诊断方面没有dsFv和BsAb的应用广泛,可能是由于其分子相对较大,不易透到肿瘤组织内部。 2.人源化抗体 2.1嵌合抗体 嵌合抗体(chimeric antibody)属第一代人源化抗体,有60%～70%的人源区域,是目前研究较多也较为成熟的基因工程抗体,它