艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术.ppt

二、质量保证 1、人员培训 检测技术人员需经过上岗培训和在岗持续培训。筛查实验室技术人员至少每2年1次。 2、环境条件 艾滋病抗体筛查实验室的设置及其建筑、设施、设备必须符合《全国艾滋病检测工作管理办法》的要求。HCV，HBV及梅毒等血清学检测在满足实验室管理要求和保证生物安全的条件下，可以与HIV检测共享空间和设备，应避免交叉污染。 3、样品采集、运送和处理 4、检测方法和试剂的选择 5、设备维护与校准 6、实验耗材 7、文件和文件管理 8、标准操作程序 （SOP） 筛查实验室SOP文件包括：（1）样品的接收、登记、处理、保存和运输；（2）检测方法和步骤；（3）试剂使用和保存；（4）仪器的使用维护和校准；（5）质量控制要求及程序；（6）结果解释与报告；（7）保密程序；（8）实验室数据、相关文件记录与保存；（9）不确定样品追踪和处理；（10）实验室安全防护及实验室的清理和消毒； （11）标题和编号；（12）编写和修订日期；（13）编写和修订人员姓名；（14）方法、目的和应用范围；（15）检测设备；（16）试剂及有效期；（17）安全防护相关步骤；（18）结果的解释和报告；（19）附录，包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。 9 、实验原始记录表（附表4） 10、 结果报告 11、 样品登记和保存 三、质量控制 四、质量评价 包括内部质量评价和外部质量评价。 1、内部质量评价 2、外部质量评价 筛查实验室应参加省级职能工作考核和PT。 3、职能工作考核 现场评价内容，筛查实验室现场评价应包括： 实验室人员组成及其职责分工；实验室分区、布局、恒温设施；仪器设备及其使用、校准记录；质量保证文件、实验室SOP文件及原始记录；实验室的安全防护措施，安全用品及安全规程； 消毒与污物处理方法及设施；HIV检测资料数据库的建设、存档、备份、安全和保密；样品保存和安全；开展的HIV检测项目和检测试剂等。 梅毒、乙肝检测要点 一、梅毒螺旋体感染人体后出现两种抗体，特异体抗体和非特异性抗体。 特异性抗体(TPHA)：为lgM，这种抗体一旦产生，终身是阳性。灵敏度高、特异性强 非特异性抗体（反应素 RPR）：为lgA与lgM的混合物，随病情发展而变化。可与正常生物组织中的类脂抗原发生非特异性结合。 二、梅毒特异性抗体检测：用于证实试验，即使患者已经经过充分的治疗，IgG抗体仍保持阳性 所以不能用以观察疗效、复发及再感染。 方法有：TP-ELISA酶联免疫法、TPPA。 梅毒非特异性抗体检测：用于梅毒诊断疗效观察和对复发或再感染的监测。 方法有：性病实验室试验（又称VDRL试验）、快速血浆反应素(RPR)试验、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、 世界卫生组织推荐用RPR等方法进行过筛试验，出现阳性者再用TPHA等方法进行确认试验。 三、梅毒滴度测定使用仪器：水平旋转仪 转速：100转/min 室温 四、乙肝定性：检测方法同艾滋病筛查。 五、乙肝定量：乙肝病毒DNA检测 特点：灵敏度高、易出现假阳性、数据波动大 要点：合理分区、防止污染。 谢谢大家！ 艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术 白志永 2015.12.30 艾滋病 抗体检测及 样品处理 实验室 质量管理 生物安全 质量控制 梅毒 乙肝 检测要点 艾滋病抗体检测及样品处理 一、HIV抗体检测筛查方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验 快速检测（RT） （建议配备合格的快速检测试剂，灰区。） 二、 筛查程序 初筛和复检流程 （图1） 三、筛查试验结果的报告 （建议用修改后附表3）（例） HIV抗体筛查试验用附表1进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。 四、 HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程 1、适用范围 HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。 2、检测程序 五、样品的处理 1样品的保存 用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2～8℃， 一周以上应存放于-20℃以下。 2.样品的运送（例） （1）应符合生物安全要求； (2)应采用三层容器对样品进行包装。 第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。 第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。 第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签、联系方式，还应易于消毒。 (3) 用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下