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如何提高苛氧菌的分离率 卫生部北京医院 张秀珍 社区获得性呼吸道感染是社区获得性感染中最主要的感染类型。在美国，社区获得性肺炎 （CAP 〕是第六位导致死亡的原因，约占14％〖1】。早期及时正确选择抗感染药物是挽救生命的关键。而提高社区获得性呼吸道病原菌的分离率，连续对社区呼吸道感染病原菌的耐药性监测的资料是临床医生正确选择抗菌药物的重要依据。 我国呼吸道感染常见病原菌的特点 流感嗜血杆菌 卡它莫拉菌 肺炎球菌 全国性监测2000 提高社区获得性呼吸道感染病原分离 由于流感嗜血杆菌。肺炎链球菌和卡他莫拉菌是苛氧性细菌，它们生长需要特殊的生长因子，如流感嗜血杆菌需 X。V因子，肺炎链球菌需要5％羊血等，又因为呼吸道其他快生长细菌的覆盖使分离率非常低。在常规细菌室应建立苛氧菌分离程序提高苛氧菌的分离率。 苛氧菌分离现状 不具备苛氧菌分离的培养基。 未建立标本送检指南，送检标本与接种标本相隔时间太长。 无CO2培养环境。 不能辨别菌落。 无鉴别试剂。 五家三甲医院实验室常规方法鉴定的正确率 流感嗜血杆菌：85％ 肺炎链球菌： 95％ 卡他莫拉菌： 66％ 十家基层实验室分离率调查 全年分离率 实验室数 3－5株 3 2－3 1 1－2 1 0 5 及时处理标本 及时将采集标本接种到适当的培养基上是提高分离率的前提。因为，除卡他莫拉菌外，流感嗜血杆菌和肺炎链球菌对干燥。对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离开机体后的外界复杂的环境中，其存活率十分低，不及时接种适当培养基是导致分离率低的主要原因。 ? 培养基 用于流感嗜血杆菌的分离培养基：50 mg/L万古霉素或300ug/ml杆菌肽。巧克力脑心浸液琼脂。流感嗜血杆菌在巧克力上生长速度不仅取决于生长因子X。V的存在，同时与革兰阳性细菌的生长干扰有关，因此加入万古霉素或杆菌肽可抑制革兰阳性细菌的 生长速度而达到选择分离的目的。巧克力琼脂以兔血巧克力生长好于羊血巧克力，二者具显著性差异P 0.001 .在培养基中加入2％鲜酵母浸液和50％鲜牛肉浸液可使菌落明显增大。 培养基 用于肺炎链球菌的分离培养基：5％羊血哥伦比亚琼脂。琼脂浓度可适当下降至1－1。2％，有利于肺炎链球菌的生长。卡他莫拉菌；可采用5％羊血琼脂，也可用巧克力选择培养基。 ? 培养环境 5～10％CO2。35℃培养24～48h 流感嗜血杆菌鉴定 流感嗜血杆菌：X。V及X＋V纸片试验，如可疑嗜血杆菌在X及V因子纸片周围均不能生长，而只能在V＋X因子纸片周围生长即可初步判其为流感嗜血杆菌。可用特异血清或乳胶试剂确定是否B群流感嗜血杆菌。 ? 同时需要XV因子流感嗜血杆菌鉴定要点 革兰阴性小杆菌，多形态。 巧克力平皿为湿润浅灰色菌落，血平皿菌落小。 在溶血的菌落周围出现菌落群。 肺炎链球菌鉴定 肺炎链球菌：以澳泼托根纸片试验与其他?－溶血链球菌区别，并作为筛选，可用特异性单克隆乳胶或自动化仪器相应鉴定卡作鉴定。 肺炎链球菌鉴定要点 革兰阳性双球菌，矛头状，不呈链。 血平皿菌落呈草绿色溶血，湿润，菌落表面无小白点。 培养时间长出现脐窝状 乳胶单克隆抗体凝集阳性。 卡他莫拉菌鉴定 卡他莫拉菌：能还原硝酸盐，不分解葡萄糖，氧化酶阳性及能产生DNA酶是其主要生化特征。初次生长菌落易在盐水中乳化，可作为筛选菌落的特点。 ? 卡他莫拉菌鉴定要点 革兰阴性或阳性双球菌。 菌落不易乳化但在盐水中可自动展开。硝酸盐还原，不分解葡萄糖可与其他萘瑟菌鉴别。DNA酶阳性。 ? 嗜血杆菌的分离鉴定 。嗜血杆菌分离培养基 血琼脂基础（哥伦比亚琼脂，胰大豆琼脂或脑心浸液 琼脂〕 5％兔血清或马血 5ｍｇ／１００ｍｌ万古霉素或30 ｕｇ／ｍｌ杆菌肽或加X.V因子 注:血琼脂溶化后平衡温度至80℃再加入血： 平衡温度至50℃和60℃再加入抗生素： 置5－8％CO2＋－2℃培养18－24ｈ 嗜血杆菌的鉴定 初级鉴定 血琼脂卫星 琼脂卫星 B溶血 流感 ＋ － － 溶嗜 ＋ － ＋ 其他 ＋ ＋ ＋－ ? 二级鉴定 X因子 V因子 B溶血 流感 ＋ ＋ － 溶嗜