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实验二 细菌的简单染色和革兰氏染色 实验目的 掌握细菌简单染色和革兰氏染色技术的原理和过程 初步掌握无菌操作的要求和注意事项 细胞的含水量、对比度 实验材料 革兰氏染色： 大肠杆菌（Escherichia coli） 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 注意事项： （1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 （2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 （3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 (4) 设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性 * 常用碱性染料、细菌染色均为细胞质染色。 革兰氏染色与细胞壁 C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。 革兰氏染色 1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染 2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。 3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。 4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它