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利用连续传代法去除质粒 实验目的： 利用连续传代法使质粒丢失，以便进行下一步的基因敲除实验。 具体实验方案如下： 首先需鉴定我公司的菌种是否为营养缺陷型菌株。 取Lysine单菌落，在基本琼脂培养基上划线，37℃培养，每天观察菌体生长情况，如果该菌能在基本培养基上生长，则确定该菌为非营养缺陷型，如果不能在基本培养基上生长，则可以确定该菌为营养缺陷型菌株。 如果鉴定Lysine菌为营养缺陷型，那么需要确定它是哪种氨基酸缺陷型，鉴定的具体方案如下： （1）挑取Lysine单菌落接种于5ml LB（含有25 μg/mL卡那霉素）液体培养基中，37℃、200rpm振荡培养30h。 （2）取1.5mL培养液于离心管中，12000rpm离心5min，弃去上清液，菌体用生理盐水洗涤2次，打匀管底菌团，每次12000rpm离心5min，最终悬浮于1.5mL生理盐水中，取1ml菌悬液涂布于基本琼脂培养基上，在培养皿的中央分别放置蘸有5g/L苏氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸+蛋氨酸和以上五种氨基酸混合液的滤纸片，37℃温箱中培养，定期观察，若某种氨基酸周围有生长圈，即表明为该类营养物质的营养缺陷型菌株。 如果鉴定出Lysine菌为某种氨基酸营养缺陷型，那么在后续用的基础培养基中均需加入该氨基酸以确保菌体能够生长。 连续传代 首先，以时间为横坐标，菌液OD值为纵坐标做一条菌体生长