高效液相色谱实验.docVIP

化学与材料工程学院 环境监测分析实验报告 实验名称： 高效液相色谱分析苯-甲苯混合物 专业班级： 应化13 学 　号： 150313135 姓 　名： 朱建南 指导教师： 翟春 实验地点： 敬行楼A210 实验日期： 2016年 11月 28日 高效液相色谱实验 实验目的 了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，掌握HPLC的基本操作； 学习苯-甲苯混合物的定性分析方法； 评价色谱柱柱效； 了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点； 学习未知样品的定量分析方法。 实验原理 不同组分因在互不相溶的流动相与固定相中的分配比不同，当两相做相对运动时，组分在两相之间反复进行多次分配，最终实现不同组分的分离。 色谱仪器的构成：包括高压输液系统、进样系统、分离系统，检测系统等 1．色谱定性分析方法 a保留时间定性 b 峰高增量定性 2．色谱定量分析方法 a 归一化法,要求所有组分必须全部出峰。 b 标准曲线法（外标法）。简单、方便, 结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响较大。 仪器与试剂 LC-1602A型高效液相色谱仪、甲醇(色谱纯) 、苯、甲苯、苯－甲苯 高效液相色谱仪操作步骤 1. 流动相的预处理 甲醇溶液，用0.45μm 有机滤膜过滤，超声波清洗器脱气10～20 min，装入流动相贮液瓶。 2. 准备苯-甲苯混合试样和苯、甲苯标样 3. 高效液相色谱仪操作 a 依次高压输液泵和检测器电源开关； b 打开色谱工作站，在仪器控制面板中，设置波长，并开灯； c打开三通阀，在仪器控制面板中，设置流速为5ml/min, 启动高压泵，排除流路中的气泡。排气结束后，点击停止按钮，停止高压泵。 d 关闭三通阀，设置最小压力(0.1)和最大压力(20)，并设置实验需要的流速(0.5ml/min)，启动高压泵。 e用平头微量注射器洗涤进样口后，取试液30 μL，将进样阀柄置于“Load”位置时注入样品，转动阀柄至“Inject”位置，此时软件自动进入“采集数据”模式。 注意！平头微量注射器用甲醇清洗3次后，再用试液清洗3次，避免气泡。 f 待所有色谱峰流出完毕后，按“停止采集”键，保存数据。 g 点击谱图处理中的定量结果，记录组分的保留时间以及峰面积、峰高等色谱信息。 注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“Load”和“Inject”位置，用流动相清洗几次。 注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“Load”和“Inject”位置，用流动相清洗几次。 4．结束工作 所有样品分析完毕后，流动相继续流动10～20 min，至基线稳定。关闭检测器，按“Stop”停泵。关闭泵电源。 五、 实验内容 1. 分别进样苯、甲苯标样和苯-甲苯混合试样，保留时间定性，记录苯-甲苯混合试样色谱谱，计算分离度。 2. a. 分别采集系列甲苯溶液以及未知试样的色谱图，根据保留时间定性，确定甲苯组分峰的位置，并测定各自的峰面积。 b. 根据实验数据，利用外标法绘制标准工作曲线，并计算待测溶液中甲苯的含量。 六、实验图谱与数据处理 1、0.001% 序号 保留时间（min） 峰面积（mAu*s） 峰高（mAu） 分离度 1 3.438 7.180 2.132 1.129 2 3.813 1.485 0.634 3.497 3 3.972 9.435 2.281 1.047 图1：含量0.001%的液相色谱图 2、0.01% 序号 保留时间（min） 峰面积（mAu*s） 峰高（mAu） 分离度 1 3.415 73.635 12.445 5.371 2 3.798 86.339 1.986 1.574 3 3.948 91.255 10.798 0.872 图2：含量0.01%的液相色谱图 3、0.1% 序号 保留时间（min） 峰面积（mAu*s） 峰高（mAu） 分离度 1 3.437 639.561 132.655 - 2 3.820 578.256 22.367 1.554 3 3.963 618.367 121.775 0.642 图3：含量0. 1%的液相色谱图 4、苯增0.1% 序号 保留时间（min） 峰面积（mAu*s） 峰高（mAu） 分离度 1 3.428 721.86 274.169 - 2 3.