高中生物选修三.doc

基因工程 1.基因工程=DNA重组技术=基因拼接技术=转基因技术（体外、分子水平） （1）原理：基因重组 理论依据：自然界中生物共用一套遗传密码 （2）目的：定向改造生物性状 （3）过程：剪切-拼接-导入-表达 ①目的基因的获取 ②基因表达载体的构建（关键） ③将目的基因导入受体细胞 ④目的基因的检测与鉴定 （只有第三步没有碱基互补配对现象） 2.基因工程与杂交育种本质都是基因重组（区别：是否可控） 3.限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、DNA水解酶都只作用于磷酸二酯键 限制酶的作用：基因工程中，识别并切割特定脱氧核苷酸序列上特定部位的磷酸二酯键 原核细胞中，切断外来DNA，自保 PS：同一限制酶切出的末端一定相同，不同限制酶切出的一般不同 限制酶切取目的基因最好用两种，防止环化 同时被两种限制酶切割产生两种不同目的基因（AB.BA） DNA连接酶：E?coliDNA连接酶只能识别黏性末端 T4DNA连接酶能识别黏性末端和平末端，但对平末端作用效果差 4.载体：质粒、动植物病毒、噬菌体衍生物 载体的作用：（1）携带目的基因进入受体细胞 （2）使目的基因在受体细胞中稳定存在 （3）使目的基因在受体细胞中表达并发挥作用 5.质粒（实质：双链DNA）多含于原核细胞 特点：①能自我复制 ②具有遗传效应 ③有一个至多个限制酶切割位点 ④有特殊的标记基因 PS：作为载体的质粒必经改造（加启动子、终止子） 质粒上的基因为细胞质基因 质粒整合到受体细胞后先自我复制再同步复制（整合到受体细胞DNA） 6.目的基因的来源：（1）人工合成（DNA合成仪）（2）在DNA文库中获取 （3）从已有物种分离 （4）PCR扩增 PCR：生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术（酶：热稳定DNA聚合酶） 7.筛选目的基因的依据：①基因的核苷酸序列 ②基因的功能 ③基因在染色体上的位置 ④基因的转录产物mRNA ⑤基因的表达产物蛋白质 8.目的基因整合到质粒/受体细胞DNA的基础： （1）DNA结构相同（规则双螺旋） （2）共用一套遗传密码 9.基因文库与基因库等大（某物种全部遗传信息） 区别：有序 目的：方便获取 10.启动子（RNA聚合酶识别并结合的部位）、终止子、终止密码子只是信号，起始密码子可被翻译 11.目的基因导入受体细胞： （1）植物：①农杆菌转化法 ②基因枪法 ③花粉管通道法 （2）动物：显微注射法（受精卵） （3）微生物：感受态细胞法（钙离子处理法） Ca2+：改变细胞膜通透性 12.转化：目的基因导入受体细胞并在受体细胞内维持稳定、表达的过程 13.目的基因的检测与鉴定 （1）分子检测：①DNA分子杂交技术（目的基因是否导入） ②分子杂交技术（是否转录）③抗原-抗体杂交技术（是否翻译） （2）个体生物学水平鉴定（确定功能表达） PS：两次筛选：（1）目的基因是否导入-选择培养基（标记基因上含有抗性基因） （2）目的基因是否表达 14.基因工程的作用：（1）植物 提高农作物抗逆性 减少农药使用降低成本 （2）动物 提高动物生长速率 改善畜产品品质 15.生产蛋白质：（1）乳腺生物反应器：产量高、质量好、成本低、易提取 膀胱生物反应器优势：不分性别 收集蛋白质容易 （2）工程菌（高效表达外源基因 例：酵母菌 出芽生殖） （3）动物细胞培养 16.基因治疗（实质：正常基因表达掩盖病变基因表达） （1）正常基因（取代病变基因） （2）反义基因（产生mRNA与病变基因的mRNA互补） （3）自杀基因（编码杀死癌变细胞的蛋白酶） PS：治疗后性状改变 但不遗传给后代 17.蛋白质工程：①定向改造已有蛋白质（主要）②制造新蛋白质（问题多，蛋白质高级结构复杂） 基础：蛋白质分子结构规律及其生物功能的关系 途径：基因合成