HPLC分析常见问题.pptVIP

HPLC分析常见问题 张庆合,李彤 大连依利特分析仪器有限公司 色谱过程 HPLC方法建立的步骤 样品情况, 分离目的 是否需要特殊的HPLC步骤、样品预处理等？ 选择设置检测器 选择液相色谱法； 预实验；估计最佳分离条件 优化分离条件 检查出现的问题或所需的特殊步骤 论证方法使之进入常规实验室 样品组分和性质情况 所含化合物的数目 化合物的化学结构（官能团） 化合物的分子量 化合物的pKa值 化合物的UV光谱图 化合物在样品中的浓度范围 样品的溶解度 分离的目的 定量？一种物质检出？未知组分确认？纯化？ 要解析出样品的所有成分？ 准确度与精密度？ 方法应设计多少种不同的样品基质？特殊化合物样品形式（如：原料药，一种或多种形态，环保样品等） 一次将分析多少样品？牺牲样品分离度，如缩短柱长或加快流速。 HPLC设备人员？柱恒温？梯度洗脱？方法通用性？ 样品预处理与检测 可直接进样的溶液 需稀释、pH缓冲、加入内标或其它定容操作 必须首先溶解或提取处理的固体 样品需预处理以除去干扰物和/或保护色谱柱或仪器不受损害的样品 方法建立和论证期间可能问题 塔板数低：色谱柱选择，二次保留、峰形不好 色谱柱易变性：色谱柱选择，二次保留的影响 色谱柱寿命短：色谱柱选择、样品预处理、3 ? pH ? 7 保留值变化：色谱柱平衡不够、样品需预处理、键合相流失 定量精度差：校正、找出误差的来源 出现