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专业综合实验报告本 题目：利用氧化石墨烯辅助分离SELEX法筛选大田软海绵酸的核酸适配体 形式： 专业综合10月 12 日— 2015年 11月 6 日 专 业： 食品质量与安全 班 级： 食质1201 学 号： 1010212135 学生姓名： 赵常欣 指导教师： 段诺 （职称： 副教授 ） 王周平 （职称： 教授 ） 江南大学食品学院  目录 摘 要······························································································2 实验背景······························································································ 实验原理······························································································2 仪器设备······························································································ 实验···············································································3 总结体会······························································································5 参考文献······························································································6 摘要：大田软海绵酸(okadaic acid,OA)属于海洋腹泻性贝毒,是一类常见的赤潮藻毒素大田软海绵酸大田软海绵（Okadaic acid，OA） 关键词：大田软海绵酸 大田软海绵酸(okadaic acid,OA)属于海洋腹泻性贝毒,是一类常见的赤潮藻毒素,富集于多种海洋软体动物的消化腺内,食用被污染的海产品后会发生腹泻性中毒,中毒症状极易与细菌性胃肠炎混淆,且OA具有长期的致癌效应。[]，在食品安全检测中有着良好的应用前景。 核酸适体的筛选技术被称为“配体指数富集系统进化”( Systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)[]，它是以组合化学技术、PCR 技术以及基因克隆测序技术等为基础的整合技术。随着近年来现代分子生物学技术的快速发展，SELEX 技术也不断创新，出现了许多具有不同应用目的的核酸适体筛选方法。本实验引入氧化石墨烯辅助进行大田软海绵（Okadaic acid，OA） 实验原理 SELEX 技术的基本原理 SELEX 技术的基本原理是体外化学合成一个单链寡核苷酸库，将它与靶物质混合，形成靶物质-核酸的复合物, 洗掉未与靶物质结合的核酸，分离与靶物质结合的核酸，以此核酸分子为模板进行PCR扩增，再进行下轮的筛选过程。通过重复的筛选与扩增，最后得到高亲和力和高特异性的“适配子”。 SELEX过程包括以下几个步骤[]:(1)体外合成随机寡核苷酸文库，随机核苷酸片段的长度一般为20~40bp(2)在适宜条件下，将单链寡核苷酸库与靶分子进行孵育，使之形成DNA-(或RNA)靶分子复合物(3)将未结合与特异结合的寡核苷酸分离开来，分离方法有滤膜法、柱层析法、凝胶阻滞法及免疫吸附法等;(4)使结合寡核苷酸与靶分子的复合物解离(5)扩增得到的特异结合的寡核苷酸库(反转录PCR或PCR)。重复以上步骤(筛选轮数由库的类型和每轮的特异性扩增情况决定)，同时检测亲和力，进行克隆测序，最后进行序列和结构分析。一般进行8~15轮的筛选。近几年SELEX过程实现了自动化[]，将人为因素的干扰降至最低，可同时进行多个独立和重复的SELEX过程，使适配子的发现更加快速、经济和高通量。 辅助筛选原理靶标：大田软海绵（Okadaic acid，OA） 辅助筛选原理图 仪器设备 水浴锅5424R离心机（Eppendorf AG.）C1