基因工程总结.docVIP

主要内容: 第一章 基因操作的基本技术 核酸制备；质粒及质粒载体；细菌的转化；凝胶电泳；核酸探针；限制性内切酶、酶切图谱及分子克隆用酶 PCR技术 第三章 核酸分析与合成 第四章 噬菌体载体及粘粒 第五章 目的基因的准备和重组及重组子的鉴定 第六章 基因在原核及真核体系中的表达 真核基因在大肠杆菌中的表达；哺乳动物基因工程；研究DNA 第七章 植物基因工程 第八章 基因工程研究进展 人类基因组计划；基因诊断、基因治疗和转基因；反义技术 ）: 原则：抑制RNA酶活性 实施：（1）高温：180℃，2小时，灭活RNase （2）二乙基焦炭酸乙酯（DEPC）,油状有毒, 是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。 （3）使用对RNase有强烈乙酯作用的细胞裂解剂，如盐酸胍、异硫氰胍（裂解细胞、抑制酶活性、解聚核糖体） （4）带手套、口罩：阻断RNA酶来源，加少污染机会。 （5）季节因素（温度）：RNase降解RNA温度高活性高，需要低温进行。 2.如何进行总RNA制品质量控制？ 答： 1）RNA A260nm 1 OD=40 (g/ml RNA 要求 A260nm/A280nm=2.0 (1.7-2.0或2.0) A260nm/A230nm 2.0 2）RNA的完整性 变性琼脂糖凝胶电泳检查