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元谋县人民医院 检验科 微生物室 穿刺液标本细菌学 检验标准操作规程 文件编号： 生效日期： 2011-11-01 文件版本： 第一版 文件页码： PAGE 1/ NUMPAGES 2 编写：常晓林 2011-09-13 审核：文佳琼 2011-11-01 批准：文佳琼 2011-11-01 1．目的 规范穿刺液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2．适用范围 穿刺液标本培养。 3．标本 3.1 标本类型 胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。 3.2 标本采集 采用无菌方法采集体内可疑感染部位的液体约2ml，注入无菌试管，或抽取穿刺液1～2ml注入多功能体液培养瓶，或抽取穿刺液2～5ml注入血培养瓶，混匀，立即送检。如怀疑厌氧菌感染，在做床边接种或接种运送培养基。 3.3 标本拒收标准 3.3.1 申请单项目与标本不符。 3.3.2 尿标本不是用无菌留取，容器不符合要求。 3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于冰箱，放置时间不应超过2小时。 4. 试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。 4.2 接种针、接种环、酒精灯、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。 4.3 试剂的有效期和使用参照试剂说明书。 5. 细菌鉴定和药敏质控 参见《质量管理程序》。 6. 检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1涂片检查 6.1.1涂片检查 脓性标本直接涂片。浆液性标本先离心（3000r/min）15分钟，取沉淀物涂片作革兰染色，观察有无细菌，以及细菌的形态。 6.2 分离培养 6.2.1 一般细菌培养 接种血琼脂平板和中国兰（或EMB、麦康凯）营养琼脂平板上，5%～10%CO2环境中，35℃培养18～24小时，根据菌落及染色形态特点，作出初步判断。 6.2.2 增菌-分离培养法 将多功能体液培养瓶颠倒混匀使液体覆盖整个固体面，然后置35℃孵育箱培养（固体面在上，液体在下）。次日观察固体表面菌苔生长及瓶中液体是否混浊。如发现有菌生长，立即涂片镜检、生化鉴定和药敏试验。此法可提高阳性检出率。 6.2.3 厌氧菌培养 床边接种或从厌氧运送培养基转种后，立即置厌氧环境中，35℃培养24～48小时；挑取可疑菌落作耐氧试验，确定为厌氧菌。（目前暂时不做） 6.2.4 结核分枝杆菌培养 参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。（目前暂时不做） 7. 操作流程 穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液等） 穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液等） 离心 厌氧培养 厌氧血琼脂平板，35℃厌氧环境培养24～48h 有菌生长 仪器或手工细菌鉴定及药敏度 发出报告 涂片、染色 多功能体液培养瓶或血培养瓶 耐氧试验 培养2日或5日无细菌生长，可发出报告 厌氧血平板生长 沉淀物涂片、染色 8. 结果报告 培养48小时无细菌生长，报告“培养2日无细菌生长”。查见细菌，报告菌名和药敏结果。 9. 注意事项 9.1 标本的采集一定要严格履行无菌操作技术，避免污染。 9.2 加入抗凝剂的标本（如胸腹水）采集后要与抗凝剂充分混匀并及时送检。 9.3 体液均需做厌氧培养，故运送过程严格厌氧环境。 10. 临床意义 各个部位穿刺液（胸腹水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）的细菌学检查对于确定该部位是否有细菌感染具有重要的诊断价值。正常穿刺液是无菌的，若从病人穿刺液中查见致病菌或条件致病菌则提示该部位有细菌感染。胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见，其次是金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等；腹腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠埃希菌、粪肠球菌，以及结核分枝杆菌多见；心包炎和关节腔液以金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等多见。 11. 危急值报告 涂片发现细菌或培养阳性均需要及时向临床报告结果。 参考文献 [1] 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.2008 [2] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007 [3] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006 [4] Murray PR. Manual of Cinical Microbilogy. 9th ed.Washington:ASM Press,2007 [5] ISO 15189：2007医学实验室-质时和能力认可准则.2007 ZYJ—437 电机试验记录 工程名称：