奶粉中蛋白质含量测定.docVIP

奶粉中蛋白质含量测定 ②实验前期准备： Ⅰ、称取奶粉样品，配制成5mg/ml的溶液。再取0.3ml该溶液于试管，再加入0.7ml去离子水，9ml考马斯亮蓝G-250，配制成奶粉含量为150μg/ml的样品溶液； Ⅱ、配制浓度为0.4mg/ml的标准牛血清蛋白（BSA）溶液,选用五个点绘制标准曲线，这五点BSA溶液体积分别为0.1，0.2，0.4，0.6，0.8ml，同时相应地加入9ml考马斯亮蓝G-250和水，每份配制成体积为10ml的溶液，即每份含BSA的量为40，80，160，240，320μg。浓度分别为4，8，16，24，32μg/ml。配制相同两组，分别记为A组和B组。如下表： 溶液序号 0 1 2 3 4 5 标准牛血清蛋白（BSA）/ml 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 去离子水/ml 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 考马斯亮蓝G-250/ml 9 9 9 9 9 9 做紫外分光光度测试，得每份试剂蛋白质-色素结合物在595nm波长下的最大光吸收A。因其光吸收值与蛋白质含量成正比，所以可用于蛋白质的定量测定； 根据所测数据，通过作图得直线A=aC+d(A为蛋白质-色素结合物在595nm波长下的最大光吸收,C为溶液浓度)。再对样品做紫外分光光度测试，得其最大光吸收A，则样品中： Ⅲ、蛋白质浓度为C=（A－d）