圆二色谱仪--硬件设计及分析条件优化-中国化学会.ppt

* * -operation in NIR calls for very narrow slits -large bandpasses are not possible in the low UV since slitwidth is mechanically limited to 2 or 3 mm Jasco J-800 to keep constant 1 nm bandwidth*, following slitwidths λ (nm) slitwidth (mm) 900 0.011 800 0.013 700 0.019 600 0.027 500 0.053 400 0.104 300 0.278 250 0.538 200 1.344 170 2.770 狭缝宽度 Bio-Logic MOS-500 to keep constant 1nm bandwidth Slitwidth always 2mm, from 163nm to 1250nm * Jasco CD 狭缝校准 * Jasco CD 波长校准 * Jasco CD 圆二色椭圆度校准 * 光源: 三种光源 (Xe / Hg-Xe / 钨丝灯)设计 Xe光谱扫描用(130…175 W), W 波长500nm以上用, Hg-Xe 停流或变温检测用 Bio-Logic MOS-500 Jasco CD单光源设计 * * 氮气吹扫 Bio-Logic MOS-500 185nm以下3升/min. 185nm以上不需氮气吹扫 Jasco APL CD 3-10L/min 溶剂 内含物 建议清洗方法 水溶液 蛋白质 DNA 生物制剂 含洗涤剂温水浸泡、稀酸润冲再大量纯水冲洗。 水溶液 盐溶液 温水、酸清洗、大量水依次冲洗。 水溶液 碱性溶液 含洗涤剂温水浸泡、稀酸、大量水依次冲洗。 有机溶液 油性基质 溶剂，含洗涤剂温水，稀酸清洗，大量水冲洗 有机溶液 酒精溶液 溶剂清洗，大量水依次冲洗 有机溶液 酸性溶液 溶剂清洗，大量水依次冲洗 有机溶液 碱性溶液 溶剂，稀酸清洗，大量水依次冲洗 比色池清洗建议 1 如何清洗比色池: 需要确定比色池上污染物类型。下表中列出了一些清洗建议： 荧光测量：使用5M硝酸清洗比色池，使用前用大量水冲洗。 稀酸：2M稀盐酸或2M稀硝酸, 酸：5M盐酸或5M硝酸, 溶剂清洗：使用对样品溶解力最强的溶液清洗 大量水清洗：使用至少10倍的纯水（包括去离子水，蒸馏水或RO）清洗 清洁剂：如果可以使用中性清洁剂，使用后，用稀酸，大量水将清洁剂清洁干净 2 注意事项： 保持比色池清洁干净是比色池可长时间有效使用的最重要因素之一。日常工作时，永远不可以令比色池处于干燥状态。在使用间隔期间，如将比色池置于水或有机溶液中，比色池就不会变干或者粘附。只可以使用镜头清洁纸或细布擦拭光学配件表面，大多数的纸制品都含有木纤维，会刮伤会损坏比色池界面或表面。日常工作结束以后，一定要将比色池清洗干净，变干后放置在合适的容器中。 3 特殊情况 5M硝酸：不可以用于清洗具有抗反射或具有镜面涂层的比色池 超声波清洗器：不建议使用超声波清洗器清洁比色池。每个清洗器都有不同的频率，如果清洗器同比色池产生共振，就会毁坏比色池。 CD(圆二色光谱仪)样品的前处理 在测量CD以前先测量一般UV/VIS吸收光谱。CD光谱的需求与UV/VIS一样：在0.5-1.0吸收值范围内的讯号会有最好讯杂比。通常样品与溶剂吸收值和大于2 O.D.时将会很困难得到正确的数据。 实际上在低波长UV扫描很困难得到正确吸收值。大部份现今光谱仪都限制在190nm以上，因此任何一次低于200nm以下测定将会是个问题。所以通常会建议直接使用CD光谱仪来做吸收光谱测量。 选择合适的缓冲液 在CD测定时选择合适的缓冲液是非常重要。缓冲液必需尽量「透明」。大部份有意思的结构信息被发现在低波长UV。这个波段也是一些缓冲液具有高吸收值会遮蔽CD讯号。对大部分工作而言10mM 磷酸钾是一个很好的选择。我们可以用适当比例的KH2PO4及K2HPO4混合达到我们想要的pH值。千万不可以用HCl来调整pH。在低UV波段氯离子会严重干扰CD测定。如果有需要辅助离子时不要使用NaCl，可以用Na2SO4