1测序技术及应用.docVIP

第二代测序（Next Generation Sequencing）概念：二代测序技术（next-generation sequencing）是对传统Sanger法测序的一次革命性的改变，是一次可对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定的高通量的测序技术，同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(deep sequencing)。 基本原理：边合成边测序。在Sanger等测序方法的基础上通过技术创新用不同颜色的荧光标记四种不同的dNTP，当DNA聚合酶合成互补链时，每添加一种dNTP就会释放出不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测DNA的序列信息。 特点：速度快，准确度高，成本低，覆盖度深，产出巨大 应用：定性方面的研究，基因组学的从头测序和重测序、小RNA的研究、转录图谱的分析以及染色体结构表观遗传学。定量方面，DNA的拷贝数，基因的表达量。两种技术454测序仪 读长：400bp 通量：500Mbp，测序技术：Polony（2005年哈佛George Church实验室发展起来的，基于乳化PCR(emulsion PCR)和自动显微镜等技术的测序方法。） 实验过程： 1）样品输入并片段化 GS FLX系统支持各种不同来源的样品，包括基因组DNA、PCR产物、BAC、cDNA、小分子RNA等等。大的样