2014分子生物学课件重点总结(一).doc

引物：是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。 Ct值：是PCR扩增过程中，扩增产物(荧光信号）到达阈值时所经过的扩增循环次数 基因诊断：应用分子生物学技术,从DNA/RNA水平检测分析致病基因的存在,变异和表达状态从而对疾病作出诊断的技术 RFLP：利用特定限制性识别位点进行基因分析的方法 基因诊断常用的技术有哪些？ 1.核酸分子杂交技术（hybridization） 2.等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide, ASO) 3.DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)分析 4.PCR-PCR/单链构象多态性分析（PCR-Single-strand conformation polymorphism，PCR-SSCP） 5.DNA测序（DNA sequence） .6DNA芯片技术（DNA chip） 基因治疗：将外源性正常基因导入到病变细胞或体细胞中，以置换或增补缺陷基因的功能，从而达到治疗遗传性疾病或获得性疾病的目的。 基因治疗的策略有哪些? 一、针对致病基因而言： （1）基因修正（gene correction） 对于致病基因中的异常碱基进行精确修复，使其恢复正常功能； （2）基因替代（gene replacement） 用正常基因在原位替换致病基因，使细胞DNA完全恢复正常状态； （3）基因增强（gene augmentation） 将正常基因导入患者体细胞内，使其整合到染色体中一起表达，以补偿缺陷基因的功能 ，但致病基因未去除； （4）基因表达调节（modulation ） 指将特定的反义核酸、RNA干扰或核酶等技术抑制目的基因表达从而消除致病基因的作用。 二、针对非致病基因而言： （1）自杀基因 这种基因导入受体细胞后可产生一种酶，它可将原无细胞毒性或低毒药物前体转化为细胞毒物质，将细胞受体细胞杀死，这种基因被称为“自杀基因”。自杀基因导入肿瘤细胞后，可将肿瘤细胞杀死。但对正常细胞则无伤害作用。 （2）免疫基因治疗 将某些细胞因子（IL-2、GM-CSF等）基因导入肿瘤患者体内，以增强患者的抵抗力。 （3）耐药基因治疗 在肿瘤化疗过程中， 把产生抗药物毒性的基因导入患者体内，从而使患者能耐受更大剂量的化疗。 （4）More…… 基因治疗的基本程序： 1. 目的基因的选择和获取 2. 目的基因与转运载体结合 3. 靶细胞的确认 4. 载体携带外源基因进入细胞 5. 外源基因的整合 6. 外源基因的表达及检测 7. 治疗作用及稳定性、安全性评价 克隆：一种无性繁殖技术。指一个亲本细胞产生成千上万个相同细胞组成的群体的过程。 DNA克隆：应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。 基因工程(genetic engineering)：有目的的通过基因克隆技术，人为的操作改造基因，以改变生物的遗传性状的系列过程。 基因克隆的技术路线： 1.分：分离制备目的DNA片段和载体 2.切：目的DNA与载体的剪切 3.接：目的DNA与载体的连接 4.转：重组DNA分子转化宿主细胞 5.筛：筛选阳性克隆，大量扩增 基因克隆的基本原理： 1.目的基因的获取 2.载体的选择和构建 3.外源基因与载体的连接 4.DNA导入受体菌 5.重组体的筛选 6.克隆基因的表达 限制性核酸内切酶（限制酶）：限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)是识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 目的基因的分离： 1、直接从染色体DNA中分离 2、人工合成 3、通过mRNA反转录合成 cDNA 4、从基因组DNA文库获取目的基因 5、从cDNA文库获取目的基因 6、PCR扩增目的基因 7、索取 载体：能携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的一类DNA分子。 质粒：是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。大小约为数千碱基对。常有1-3个抗药性基因，以利于筛选。 质粒的特性： ⑴ 存在于细菌等细胞质中⑵ 双链环状DNA