HOLC法测定排石合剂中芍药苷的含量.docVIP

HOLC法测定排石合剂中芍药苷的含量 叶文慧1 陈露雨1 范丽梅2 陈思3 胡春玲4 通讯作者:李晖△ （广东省妇幼保健院 511400） 摘要：目的 建立用高效液相色谱法测定排石合剂中芍药苷的方法。方法 以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30:70)为流动相；检测波长为230nm。结果 芍药苷浓度在5.94μg/ml～594μg/ml之间线性关系良好（r=1.0000）,平均回收率为99.12%。结论 该方法简便，准确，重现性好。 关键词：高效液相色谱；排石合剂；芍药苷；含量测定 排石合剂由金钱草 鸡内金 地龙 白芍 川牛膝 元胡 泽泻 茯苓 滑石 小蓟 桃仁 红花 甘草 车前子等13味药材组成，为我院自制制剂，有清热利湿，理气活血，通淋排石之功效；主治各种泌尿系结石。包括肾盏、肾盂、输尿管、膀胱结石。参考相关文献参[ 1-12 ]，本实验选择芍药苷作为指标成分，采用高效液相色谱法对该制剂中主要药物白芍的含量进行研究，其结果可为该制剂建立完善的质量标准提供一定的参考依据。 1仪器与试药 1.1仪器：Agilent 1200 高效液相色谱仪（紫外检测器）；岛津LC-20A高效液相色谱仪（PDA检测器）；Sartorius BT125D电子天平 对照品及来源：芍药苷（中国食品药品检定研究院，批号：110736-201337）含量为94.9%。 1.2试剂：甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂均为分析纯。 1.3排石合剂（聊城市中医医院，批号20140826， 2 方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性试验 以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30:70)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。 2.2样品制备 2.2.1供试品溶液的制备：精密量取本品2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2.2.2对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。 2.3方法学考察 2.3.1最大吸收波长的确定 取芍药苷对照品溶液，用PDA检测器进行全波长扫描，在230nm和276nm处有最大吸收，参考相关资料确定检测波长为230nm。见图1。 图1 芍药苷紫外吸收光谱 2.3.2精密度试验 2.3.2.1重复性 同一均匀供试品，连续取样6份，照设定的方法分别测定含量。试验结果表明，该方法重复性良好。结果见表1。 表1 重复性试验结果 1 2 3 4 5 6 RSD% 取样量（ml） 2 2 2 2 2 2 含量（mg/ml） 0.2832 0.2871 0.2847 0.2864 0.2833 0.2859 0.6% 2.3.2.2中间精密度 结果见表2 表2 中间精密度试验结果 1 2 3 4 5 6 RSD% 取样量（ml） 2 2 2 2 2 2 含量（mg/ml） 0.2851 0.2837 0.2864 0.2835 0.2842 0.2828 0.5% 2.3.3准确度试验 取已知含量的供试品适量，加入适量芍药苷对照品，制成低、中、高三个不同浓度的供试品溶液各3分，分别测定其含量，计算回收率。试验结果表明，该方法准确度符合规定。结果见表3。 表3 回收率试验结果 取样量（ml） 加入量（mg） 测得量（mg） 回收率 低 1 0.0594 0.2016 98.9% 1 0.0594 0.2035 99.2% 中 1 0.0891 0.2355 99.3% 1 0.0891 0.2367 98.7% 高 1 0.1188 0.2639 99.1% 1 0.1188 0.2652 99.5% 2.3.4线性和范围 取芍药苷对照品，加甲醇制成标准系列，分别测定峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。试验结果表明，芍药苷浓度在5.94μg/ml～594μg/ml之间线性关系良好。测定结果见表4。 表4 芍药苷线性关系考察结果 1 2 3 4 5 6 响应因子RSD% 浓度（μg/ml） 5.94 29.7 59.4 118.8 297 594 峰面积 81.275 412.083 811.17 1628.125 4117.306 8119.541 响应因子f 13.683 13.875 13.656 13.704 13.863 13.669 1.6% 标准曲线方程 A= 13.784C-0.6019 r =1.0000 2.3.5耐用性试验 分别考察流动相比例变