HPLC法测定注射用盐酸万古霉素含量.docVIP

HPLC法测定注射用盐酸万古霉素的含量 庄权权（泉州市第一医院药剂科，泉州市 362000） 摘要：目的：建立测定注射用盐酸万古霉素含量的高效液相色谱法。方法：采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Shim-pack VP-ODS C18(250mm×4.6mm)，以0.025mol/L磷酸二氢钾缓冲液—甲醇（80：20）为流动相，检测波长为230nm，流速0.7ml/min，柱温40℃。结果：在5mg/L~80mg/L范围内，万古霉素浓度与峰面积的线性关系良好（r=0.9999），高中低3种浓度的加样回收率为98.65%~101.7%，相对标准差为0.10%~0.98%。结论：所建立的方法准确、简便，适用于注射用盐酸万古霉素的质量控制。 关键词 HPLC 盐酸万古霉素 含量测定 万古霉素是一种糖肽类抗生素。其作用机制是以高亲和力结合到敏感细菌细胞壁细胞前体肽聚末端的丙氨酸，阻断构成细菌细胞壁的高分子肽聚糖合成，导致细胞壁缺损而杀灭细菌。此外，它也可能通过改变细菌细胞膜渗透性，并选择性地抑制RNA的合成[1]。 万古霉素抗菌谱窄，抗菌活性强，疗效确凿，属杀菌剂。它口服不易吸收，主要分布于血浆，可透入各体腔和胎儿体内，但不易进入房水，佷少在体内代谢，主要在肾内排泄，血液透析和膜膜透析不能清除此类药物。万古霉素对革兰阳性球菌（肠球菌除外），敏感的阳性杆菌及厌氧阳性球菌和阳性杆菌均呈杀菌作用，为杀菌药。万古霉素对肠球菌呈抑菌作用，对肠球菌需在氨基糖苷类抗生素协同作用下才呈杀菌作用[2]，但近年来万古霉素不良反应屡有报道,如休克、过敏样症状、急性肾衰、粒细胞减少等[3-6]。对重症病人、长期使用本药患者、低出生体重儿、新生儿和幼儿与可引起肾、听力损害的药物（氨基糖苷类抗生素等）联合的患者应控制其血药浓度[7]。本文建立了注射用盐酸万古霉素含量反相高效液相色谱法（RP-HPLC）。该法简便、准确，适用于注射用盐酸万古霉素的质量控制。 1 材料与方法 1.1 仪器 LC-20A液相色谱仪（日本岛津公司）；LC-solution色谱工作站（日本岛津公司）；SPD-10Avp紫外检测器；CP225D型电子天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司）；KO-100DB超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)；Simplicity超纯水系统（美国Millipore公司）。 1.2 试药 万古霉素对照品（中国药品生物制品检定所，规格：100mg，批号：0360—200301）；注射用盐酸万古霉素（Eli Lilly Japan K.K，规格：0.5g，批号：MW19231）；甲醇为色谱醇；水为重蒸馏水；磷酸二氢钾等试剂均为分析纯。 1.3 色谱条件与系统适应性[8] 色谱柱为Shim-pack VP-ODS C18(250mm×4.6mm)；流动相为0.025mol/L磷酸二氢钾缓冲液—甲醇（80：20），检测波长为230nm，流速0.7ml/min，柱温40℃，进样量：20μl。 1.4 对照品溶液的制备 精密称取万古霉素对照品约10mg，置25ml量瓶中，加10ml双蒸水溶解后，再加磷酸二氢钾缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 1.5 供试品溶液的制备 取0.5g注射用盐酸万古霉素，精密称定，置25ml量瓶中，加10ml双蒸水溶解后，再加磷酸二氢钾缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 1.6 线性关系考察 取万古霉素对照品适量，精密称定，用磷酸二氢钾缓冲液溶解制备成5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L系列浓度溶液，按上述色谱条件，进行含量测定。 1.7 精密度试验 取万古霉素对照品适量，精密称定，用流动相制成含万古霉素5mg/L、20mg/L、80mg/L的溶液，分别精密吸取20μl注入液相色谱仪，重复进样5次。 1.8 稳定性试验 按“1.4”项方法制备样品溶液，分别于0、0.5、1、2、4h取样，精密量取20μl注入液相色谱仪测定。 1.9 重复性试验 按“1.5”项方法平行制备6份同一样品溶液测定含量。 1.10 回收率试验 于空白辅料中，按处方量加入万古霉素对照品适量，用流动相制成低、中、高三种浓度万古霉素溶液（5mg/L、20mg/L、80mg/L），按外标法分别测定并计算回收率及RSD。 2 结果 2.1 色谱条件与系统适应性试验 在此色谱条件下，对照品和样品中万古霉素与其相邻色谱峰的分离度均1.5，理论半数(n)按万古霉素峰计算不低于2000。供试品、对照品及空白辅料色谱图分别见图1、图2及图3。 A B C 图