HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量.docVIP

描述：目的 测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研究提供依据。 方法 采用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；使用Agilent SB-C18（4.6 m... 　　[摘要]?目的?测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研究提供依据。?方法?采用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；使用Agilent?SB-C18（4.6?mm×250?mm，5?μm）色谱柱；以乙腈-0.1%磷酸（8∶92）为流动相，流量1.0?ml/min。?结果?建立了HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，苦杏仁苷进样量在0.0824～2.0600?μg范围内，线性关系良好（r=0.9995），平均回收率为99.03%，RSD=2.25%（n=6）。?结论?该方法准确、重复性好，可用于止咳平喘丸的质量控制。?　　止咳平喘丸由苦杏仁（炒）、麻黄、石膏、紫苏子（炒）、厚朴（姜制）、陈皮、罂粟壳（蜜炙）、甘草、茶叶等中药材加工制成的复方纯中药制剂，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药方成制剂第三册》。功能主治：清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。该药原标准过于简?单，标准中只对其性状和检查项确定了检验标准，无其他检定方法，对其产品的内在质量无法控制。为控制止咳平喘丸的质量，本实验采用高效液相色谱（high?performance?liquid?chromatography，HPLC）法拟建立止咳平喘丸的质量控制方法，为该制剂的质量控制提供方法，为定量指标提供依据。?　　1?材料与方法?　　1.1?实验仪器?　　岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包括LC-2010型紫外检测器）；LC?Solution色谱工作站。?　　1.2?试剂与试药?　　乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水。苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110820-200403）；止咳定喘丸（东芝堂药业有限公司，批号：130203、130303、130403）。?　　2?方法与结果?　　2.1?色谱条件?　　色谱柱Agilent?SB-C18（4.6?mm×250?mm，5?μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（8∶92）；柱温：30℃；体积流量：1.0?ml/min；检测波长207?nm；进样量10?μl。理论板数：按苦杏仁苷计算应不低于7000，外标法计算含量。?　　2.2?溶液制备?　　2.2.1?对照品溶液?取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每毫升含80?μg的溶液。?　　2.2.2?供试品溶液?取本品粉末3.5?g，精密称定，置塞锥形瓶中，精密加入甲醇25?ml，密塞，称定重量，超声处理30?min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，计算机网络设计摇匀，过滤，精密量取续滤液5?ml，置50?ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45?μm）滤过，即得。?　　2.2.3?阴性对照液?按处方及工艺制备不含苦杏仁的阴性样品，同供试品溶液的制备方法学考察阴性对照品溶液。?　　2.3?方法学考察?　　2.3.1?阴性干扰实验?取“2.2”项下3种溶液各10?μl，分别注入高效液相色谱仪测定。结果色谱图中在苦杏仁苷峰相应的保留时间附近未检出干扰峰（图1）。?INCLUDEPICTURE \d /includes/ueditor/php/upload11394693162395985.png \* MERGEFORMATINET  INCLUDEPICTURE \d /includes/ueditor/php/upload11394693172609811.png \* MERGEFORMATINET 　 ? 　2.3.2?线性关系考察?分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25?μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为Y=117?632X-347?713，r=0.9995。结果表明，苦杏仁苷对照品进样量在0.0824～2.0600?μg范围内与峰面积有良好的线性关系。?　　2.3.3?精密度试验?精密吸取对照品溶液10?μl，重复进样6次，记录色谱图，按峰面积计算，结果RSD=0.18%，说明仪器精密度良好。?　　2.3.4?重现性试验?取同一批号样品6份，分别依法处理后测定。结果RSD=0.64%，表明该方法重复性良好。?　　2.3.5?稳定性试验?取同一批号样品溶液，在室温条件下放置，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24?h进样，测得峰面积值RSD=0.