第24章病毒与细胞的相互作用技术总结.ppt

第24章 病毒与细胞的相互作用 制作：临沂大学生命科学学院 微生物与免疫学教研室 第24章 病毒与细胞的相互作用 第一节 病毒的细胞培养 第二节 病毒与细胞的相互作用 目的要求： 1、掌握病毒的细胞培养的特点和 方法 以及病毒与细胞的相互作用机制。 2、了解病毒持续性感染的机制和干扰素的产生和作用机理 。 ?重点：病毒的细胞培养的特点、方法和病毒与细胞的相互作用机理 ?难点：病毒与细胞的相互作用机理和病毒持续性感染的机制和干扰素的产生和作用机理 第一节 病毒的细胞培养 病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 一、动物接种 接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。 按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。 动物接种的优缺点： 优点：⑴不需要复杂的仪器设备； ⑵技术简单； ⑶易成功 缺点：⑴个体差异大 ⑵价格昂贵 ⑶数量有限 ⑷需要隔离畜舍 二、鸡胚接种 一种比较经济简便的方法。 鸡胚接种的优缺点： 优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大，不需特殊设备 缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的病毒。 三、细胞培养 细胞培养(cell culture)是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。 (一)细胞培养的优点： 每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等 无个体差异，准确性和重复性好 严格执行无菌操作 细胞培养本身就能显示病毒的生长特征 应用空斑技术可进行病毒的克隆化 （二）细胞的类型 根据细胞来源、染色体特征及传代次数，可分为三种类型： 1.原代细胞(primary cell)：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而获得的单个细胞，再生长于培养器皿中。大多数组织均可制备原代细胞，但生长的快慢及难易程度不一。 （二）细胞的类型 2.二倍体细胞(diploid cell strain)：将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。但巨噬细胞、神经细胞等体外培养时一般不分裂，很难获得二倍体细胞株。 （二）细胞的类型 3.传代细胞系(diploid cell line)：能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成，染色体数目不正常，为异倍体。 优点：传代及培养方便 缺点：对有的分离野毒（样本中的病毒）不敏感 由于担心致肿瘤的潜在危险，传代细胞一般不能用于制备疫苗。 常用传代细胞系：HeLe(人子宫癌细胞)，Vero(非洲绿猴肾细胞)，BHK21(乳仓鼠肾细胞)，PK15(猪肾细胞)等 （三）细胞培养的方法 常用的有静置培养和旋转培养两种 1.静置培养(stationary culture)：实验室常用。将消化分散的细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养，数天后细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单层。哺乳动物和禽类的细胞培养温度一般为37℃。 （三）细胞培养的方法 2.旋转培养(roller culture)：大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞贴附于玻瓶四周，长成单层。 基本方法与静置培养基本相同，不同之处是培养的细胞不断缓慢旋转（5-10r/h）。 （三）细胞培养的方法 另外为满足某些特定需要可采取悬浮培养和微载体培养两种 1.悬浮培养(suspension culture)：搅拌使细胞处于悬浮状态，并不断补充营养和矫正PH值，使之生长或存活，适用于不需要贴壁生长的细胞系。如NS-1（一种骨髓瘤细胞系） 1.微载体培养(microcarrier culture)：在悬浮培养的基础上，结合微载体的培养技术，微载体直径在100-200μm的微粒，对细胞无毒，细胞附着其上生长成单层，由于单位体积表面积大，所获得的细胞数多。对规模化细胞生产和疫苗生产有较大吸引力。 第二节 病毒与细胞的相互作用 杀细胞感染 非杀细胞感染 引致持续感染，对细胞代谢无影响。 产生干扰素 病毒的种类千差万别，宿主的细胞的种类也多达200多种，病毒与宿主细胞之间的作用的表现形式各异。 一、病毒与细胞相互作用的类型 病毒感染可分为杀细胞及非杀细胞两大类。并非所有的病毒感染都能产生和释放子代病毒颗粒。宿主细胞感染病毒发生的变化可能是细胞死亡或细胞转化，也可能是病毒非生产性