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.2 巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的降解机理及其控制策略 j4:Xel/ ?1.2.1 巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的降解机理 8|{d1dy ?在 外源蛋白的表达过程中，宿主菌毕赤酵母的胞内和胞外均有一定量的蛋白酶的表达，因此，不论是胞内表达亦或是分泌表达，大多数外源蛋白均面临着被降解的问 题，这也是影响表达量的一个重要因素，同时，还增加了纯化目的蛋白的难度。近年来，蛋白酶的研究是P.pastoris表达系统一个重点和热点。越来越多 的蛋白酶的遗传背景和生理生化性质得到深入的研究[52; 53]。P.pastoris能根据细胞生长环境（碳源的改变以及细胞或细胞器的胁迫）来调整自身酶系，以合成与降解不同的蛋白和细胞器，液泡是蛋白质降 解最主要的场所[54]，另一降解场所是细胞基质蛋白酶体中。但是，对于外源蛋白来说，其降解常在表达和分离纯化的第一步，主要是由培养基中胞外蛋白酶， 细胞外膜结合蛋白酶（cell-bound proteases）[55]和细胞自噬或裂解释放的胞内蛋白酶降解的[5]。胞内蛋白酶主要涉及降解蛋白质前体产生活性蛋白；切除转运出膜后的蛋白质信 号肽；使调控蛋白失活；降解变异或不需要的蛋白质；提供营养，前体和能量。胞外蛋白酶分泌较少，主要降解部分蛋白质提供氨基酸和多肽等营养[22]。 bo-L|RO ?根 据蛋白酶的分泌和作用地点，P.pastori