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第一章 绪论 第二章 发酵液预处理，细胞的分离、破碎 发酵液的性质：①产物浓度较低、②悬浮颗粒小、③固体粒子可压缩性大、④粘度大、⑤性质不稳定 2、常用的发酵液预处理方法：①降低液体的粘度：水稀释法、加热法 ②调整pH值 ③凝聚和絮凝 3、凝聚：在电解质作用下，由于胶粒之间双电层电排斥作用降低，从而胶体体系不稳定。 絮凝：在某些高分子絮凝剂存在下，基于桥架作用，使胶粒形成较大絮凝团的过程。 包含体：很多利用大肠杆菌为宿主细胞的外源基因表达产物不分泌到细胞外，而在细胞内凝聚成的无生物活性的固体颗粒。 过滤：利用多孔性介质截留悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法。 4、细胞破碎的流程图 5、细胞分离常用的方法？ 方法：重力沉降、离心沉降、过滤 A.重力沉降 絮凝剂：高分子絮凝剂：聚丙烯酰胺、聚乙烯酰胺等 无机的凝聚剂：中性盐（硫酸铝、氯化钙等） B.离心沉降 离心分离法：差速离心、区带离心 低速离心，高速离心，超速离心 过滤式离心，沉降式离心 冷冻离心：低温下操作 C. 过滤 名解：利用多孔性介质截留悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法。 6、机械破碎法与化学破碎法的比较 机械破碎法 优点：处理量大、破碎效率高、速度快，适用于工业规模的细胞破碎。 缺点：由于操作条件比较剧烈，往往容易造成细胞的过度破碎，不利于后续处理 化学破碎法 优点：选择性高，胞内产物的总释放率低，料液粘度小，有利于后处理过程。 缺点：适用范围小，通用性差，破碎速度慢，处理时间长，破碎效率低，不适于大规模细胞破碎操作。 由以上比较可知，两种方法各有利弊，把二者结合起来使用，则可起到取长补短的作用，能够得到很好的破碎效果。 7、细胞破碎化学试剂处理：增大细胞壁通透性 常用试剂：表面活性剂、螯合剂、有机溶剂、变性剂 常用的细胞破碎方法有哪些？ 一、机械破碎： 机械破碎的原理是细胞在机械作用力下受到压缩和剪切而破碎。细胞越小，所需压缩或剪切力越大，越难破碎。 处理量大、效率高、速度快，是工业规模的主要手段 1. 高压匀浆： 破碎原理：主要利用细胞悬液在高压作用下液相剪切力以及细胞与固定表面的撞击力而使之破碎。 压力通常为20-70MPa 适用于酵母和大多数细菌细胞的破碎 需冷却处理，以保护产物的生物活性 2. 珠磨 破碎原理：利用在高速搅拌作用下，细胞和微球相互磨擦碰撞而破碎。细胞受研磨剪切和撞击而破碎 特点：适用范围较广；但有效能量利用率很低，设计操作时应充分考虑冷却系统的热交换能力；影响破碎率的操作参数较多。 3. 撞击破碎 细胞冷冻后成为刚性球体，再进行高速撞击而破碎 特点：细胞破碎均匀；可通过调节载气压力控制细胞破碎程度；适用于细胞器（如线粒体、叶绿体）的回收。 4. 超声波破碎 破碎原理：超声波作用下液体发生空化作用，产生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎。 影响因素：细胞种类、浓度和超声波的能量等。 特点：适用范围广,适用于多数微生物细胞的破碎。但有效能量利用率极低，操作中产生热，需在冰水或有外部冷却的容器中进行, 故不易放大，多在实验室使用。 二、化学和生物化学法 1. 酸碱处理 2. 化学试剂处理：增大细胞壁通透性 表面活性剂、螯合剂、有机溶剂、变性剂 3. 酶溶：利用溶解细胞壁的酶处理细胞 不同的细胞用不同的酶：如溶菌酶适用于细菌；而酵母细胞的酶溶需用Zymolyase、(-1,6-葡聚糖酶或甘露糖酶；破坏植物细胞则用纤维素酶。 4. 自溶：通过调节温度、pH或添加有机溶剂，诱使细胞产生溶解自身的酶的方法。 三、物理渗透法 1. 渗透压冲击法： 破碎原理：细胞在高渗透压介质中平衡后，再突然将其转至低渗透压环境中，水会大量进入细胞，使细胞壁和膜胀破。 特点: 温和，适用于易于破碎的细胞（动物细胞和革兰氏阴性菌） 2. 冻结-融化法 细胞急剧冻结后在室温缓慢融化，此操作反复进行多次，使细胞受到破坏。 第三章 沉 淀 1、什么是沉淀？种类？沉淀方法的分类？ 沉淀：利用沉淀剂使所需提取的生化物质或杂质在溶液中的溶解度降低而形成无定形固体沉淀的过程。 种类：盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀等 分类 有机溶剂沉淀的特点：①分辨率高、②溶剂容易分离，并可回收使用、③产品洁净，无需脱盐等、④容易使蛋白质等生物大分子失活、⑤应注意在低温下操作（有机溶剂预冷）、⑥成本高 2、盐溶：在低浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质在水溶液中的溶解度增大的现象。 盐析：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质在水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。 3、盐析的