SUMO论文小鼠胚胎干细胞中SUMO修饰对Nanog调控作用研究.docVIP

SUMO论文：小鼠胚胎干细胞中SUMO修饰对Nanog调控作用研究 【中文摘要】SUMO修饰是真核细胞内广泛存在的一种翻译后修饰途径,调节细胞内多种蛋白的功能、稳定性和亚细胞定位。Nanog基因是维持胚胎干细胞多能性和自我更新的关键基因,为了阐明SUMO修饰对Nanog基因的调控作用,本研究以F9畸胎瘤细胞为模型,利用实时定量PCR(Real time PCR)、免疫印迹(Western blot)、双荧光素酶报告基因分析(Dual-Luciferase Reporter assay)、免疫荧光染色等方法,从不同角度研究了SUMO修饰对Nanog基因的影响。实验结果如下:1.利用重叠延伸PCR(Overlap Extension PCR,OE PCR)方法,克隆小鼠Nanog基因启动子区-230—+50bp序列和Oct4/Sox2元件突变的序列,分别将野生型和突变体启动子片段插入荧光素酶报告基因载体pGL4.10中,构建Nanog启动子荧光素酶报告基因载体pGL4-230 luc,pGL4-230 Soxmut luc,pGL4-230 Octmut luc和pGL4-230 Octm/Soxm luc。测序结果证明构建的载体序列与预期结果一致。用上述载体分别转染多能性的F9畸胎瘤细胞和小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3,双荧光素酶报告基因分析检测启动子活性。结果表明,本实验中克隆