实验一细菌的检查法及真菌观察.ppt

医学微生物实验 Experiment of Medical Microbiology 细菌的培养法 细菌生长繁殖必要条件 营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子 环境条件：酸碱度、渗透压、温度和必要的气体 培养基的定义 微生物生长繁殖所需要的营养物质混合而成的营养基 质，一般pH为7.2~7.6，高压灭菌后使用。 培养基分类 按其营养组成和用途不同 基础培养基： 营养培养基： 选择培养基： 鉴别培养基： 厌氧培养基： 按物理状态不同 液体培养基: 用于大量繁殖细菌 固体培养基: 液体培养基中加入1.5%~2.5%琼脂粉，用于细菌分离和纯化 半固体培养基: 琼脂粉含量在0.3%~0.5%， 用于观察细菌的动力和短期保存菌种 细菌在培养基中的生长情况 液体培养基：表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 固体培养基：菌落，菌苔 半固体培养基： 细菌培养的应用 在医学中的应用 感染性疾病的病原学诊断 细菌学的研究 生物制品的制备 在工农业生产中的应用 在基因工程中的应用 实验三 细菌的培养 培养基 菌种 方法 液体接种 斜面接种 细菌的形态和结构 革兰染色法 菌种：两个单菌落E、S 试剂：生理盐水、结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄 材料：酒精灯、接种环、玻片、 步骤 ①涂片 ②自然干燥 ③固定 ④染色 初染：结晶紫，1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。 媒染：碘液， 1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。 脱色：95％乙醇数滴，时间半分钟（30秒），用水冲洗。 复染：沙黄， 1~2滴，1分钟，用水冲洗。 ⑤滤纸吸干，油镜观察。 抗酸染色法 标本：结核病人痰涂片，枯草涂片 试剂：石炭酸复红、3%盐酸酒精、碱性美兰 步骤 ①固定 ②染色 初染：石炭酸复红数滴，时间8~10分钟，用水冲洗。 脱色：3%盐酸酒精数滴，时间0.5~1分钟（30秒），用水冲洗。 复染：碱性美兰， 1~2滴，1分钟，用水冲洗。 ③滤纸吸干，油镜观察。 真菌镜下形态观察 1.霉菌小培养：菌丝，孢子 2.新生隐球菌墨汁涂片：厚荚膜、芽生孢子 3.白假丝酵母菌：厚膜孢子、假菌丝 * * 巩固基础理论、基本概念 学习基本操作 树立无菌概念 微生物实验目的 实验室规则： 1.必须穿白大衣； 2.尽量保持安静； 3.自己的实验器材(试管、平皿等)注明菌种、日期、组、姓名； 4.除示教片以外，沾染过传染物的实验器材必须放入消毒缸； 5.注意安全；不要随意调动实验室仪器。 6.实验结束后，泡手、洗手。 分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面分散开，称分离培养。 菌落：单个细菌生长后形成的肉眼可见的细菌集团叫菌落。 纯培养：挑取一个菌落接种到另一培养基中，生长出来的细菌为纯种，称为纯培养。 无动力 有动力 普通琼脂平板 大肠、金葡混和菌液 平板划线 肉汤培养基 大肠、枯草杆菌 液体接种 半固体培养基 变形、痢疾杆菌 穿刺接种 目的：学习掌握细菌分离和培养的各种基本技术 斜面培养基 大肠杆菌 斜面划线 2人/组 four-area streak plate technique IV II I 1/5 I 1/10 Rotate 90? Flame loop Rotate 90? Rotate 90? III 1/4 Flame loop 细菌的形态和结构 细菌基本形态： 球菌 杆菌 螺 形 菌 细菌基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质 细菌特殊结构： Spore Capsule Flagella Pilus？？？ 细菌的形态和结构 ：观察示教片：9张 鞭毛的形态、数量、位置 变形杆菌 鞭毛 芽胞在菌体上的位置、大小 破伤风梭菌 芽胞 荚膜大小与菌体的关系 肺炎球菌 荚膜 细菌 特殊 结构 霍乱弧菌 弧菌 大肠杆