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3.(2014·新课标全国卷Ⅱ)植物甲具有极强的耐旱性,其耐旱性与某个基因有关,若从该植物中获得该耐旱基因,并将其转移到耐旱性低的植物乙中,有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题: (1)理论上,基因组文库含有生物的　　　　基因;而cDNA文库含有生物的　　　　基因。 (2)若要从植物甲中获得耐旱基因,可首先建立该植物的基因组文库,再从中　　　　出所需的耐旱基因。 【解题指南】关键知识:PCR反应中加热至94℃以上时,DNA解旋→冷却到55℃左右,引物结合到互补DNA链→加热至72℃左右,TaqDNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。 【解析】选A、B、C。本题考查基因工程技术。限制性核酸内切酶大多是特异性识别6个核苷酸序列,但也有些限制性核酸内切酶能识别由4、5或8个核苷酸组成的序列,A错误;PCR中耐高温的DNA聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用,B错误;载体质粒上抗生素抗性基因可作为标记基因,供重组DNA的鉴定和选择,不是抗生素合成基因,C错误;目的基因导入了受体细胞不一定都能正常表达,D正确。 2.(2015·苏州模拟)下列有关基因工程和酶的相关叙述,正确的是 (　　) A.同种限制性核酸内切酶既可以切割目的基因又可以切割质粒,因此不具备专一性 B.载体的化学本质与载体蛋白相同 C.限制性核酸内切酶不能切割烟草花叶病毒的核酸 D.DNA连接酶可催化脱氧核苷酸链间形成氢键 【解题指南】解答本题的关键是: (1)明确限制性核酸内切酶的识别和切割位点,由识别和切割位点的特异性推导酶的专一性。 (2)识记载体的组成。 【解析】选C。一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切点上切割DNA分子,因此具有专一性;载体有质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等,成分为DNA,载体蛋白的化学本质是蛋白质;烟草花叶病毒的核酸为RNA,限制性核酸内切酶不能切割它;DNA连接酶可催化DNA片段间磷酸二酯键的形成。 【延伸探究】本题C项中,限制性核酸内切酶能作用于哪种类型的核酸? 提示:限制性核酸内切酶仅作用于DNA。 3.(2015·宿迁模拟)根据基因工程的有关知识,回答下列问题: (1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有　 ? 和　　　　。 (2)质粒载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下: AATTC……G 　　G……CTTAA 为使载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是　 　? 。 【解析】(1)当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时,产生的是黏性末端,而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时,产生的则是平口末端。(2)为使载体与目的基因相连,不同的限制酶应切割出相同的黏性末端,它们必须要能识别相同的核苷酸序列,并且使每条链中相同的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 答案:(1)黏性末端　平口末端 (2)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的黏性末端相同 【知识总结】对限制酶切割位点的两点要求 (1)位置要求:限制酶切割位点所处的位置必须在标记基因外,从而保证标记基因的完整性。 (2)数量要求:选择限制酶切割目的基因时,被选择的限制酶在目的基因的两侧都要有识别序列,这样切割出来的目的基因才能与质粒结合。 4.(2014·天津高考节选)嗜热土壤芽孢杆菌产生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一种耐热纤维素酶,为使其在工业生产中更好地应用,开展了以下试验: 利用大肠杆菌表达BglB酶。 (1)PCR扩增bglB基因时,选用 　 ? 基因组DNA作模板。 (2)如图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进入该质粒,扩增的bglB基因两端需分别引入　　　　　和　　　　　不同限制酶的识别序列。 (3)大肠杆菌不能降解纤维素,但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力,这是因为　　 　　　　　? 　　　　　　　　　　。 【解题指南】 (1)图示信息:质粒作为载体,应具备的结构有限制酶切割位点、启动子、终止子和标记基因等。 (2)关键知识:获取目的基因、基因表达载体的构建。 【解析】本题考查基因工程、酶的活性和变异的相关知识。 (1)bglB基因存在于嗜热土壤芽孢杆菌基因组中,故应以该菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增。 (2)目的基因与质粒进行重组时,需将目的基因插入启动子和终止子之间,且应靠近启动子和终止子,结合示意图可知,应在扩增的bglB基因两端分别引