复旦大学附属肿瘤医院2002级肿瘤学临床型博士生开题报告.pptVIP

* 检测四个甲基化位点，Mean rank什么意思呢？ * 放在最后一张。免得干扰注意力 第四届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 第 页 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 局部进展期散发性结直肠癌CpG岛甲基子表型 和预后的关系 蔡国响 博士 复旦大学附属肿瘤医院 大肠外科 复旦大学大肠癌诊治中心 第六届中国肿瘤学术大会－上海·2010 1 结直肠癌发病率居上海市区恶性肿瘤第二位。 30－40％结直肠癌患者最终死于复发转移。 TNM分期是目前预测复发转移、指导辅助治疗的最佳依据。 美国SEER数据显示：部分TNM期别和预后之间缺乏相关性（ ⅢA期结直肠癌生存率反而高于ⅡB期）。 在TNM分期基础上，发现和应用新的分子生物学指标提高预后判断准确性是目前肿瘤研究热点。然而，迄今尚未找到公认的具有临床应用价值的预后分子指标。 研究背景 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 2 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 研究背景 表遗传学 遗传学 非DNA序列变化引起的 可遗传的基因表达改变 全基因组低甲基化 癌基因异常甲基化 抑癌基因过度甲基化 组蛋白异常修饰 3 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 研究背景 4 抑癌基因启动子甲基化导致基因失表达 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 研究背景 正常大肠粘膜 大肠癌组织 基因启动子CpG岛非甲基化 基因启动子CpG岛甲基化 大肠癌相关肿瘤特异性甲基化位点：p14 、hMLH1、p16、MGMT、MINT1 5 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 研究背景 CpG岛甲基子表型（CIMP）被认为是继染色体不稳定（CIN）和微卫星不稳定（MSI）之后发现的第三种基因组不稳定机制。 CIMP反映多个抑癌基因的同时过度甲基化状态。 CIMP（＋）判断标准：同时甲基化位点的数目达到2/3、3/5、3/6或3/7等及其以上 。 结直肠癌CIMP的预后意义相关研究较少，存在一定的争议。 文献中未见同时研究三种基因组不稳定机制（CIMP、CIN和MSI）的预后价值的研究。 6 探讨各种临床病理以及分子生物学指标和Ⅱ/Ⅲ期散发性结直肠癌预后的关系。 探讨结直肠癌多基因甲基化的预后意义。 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 研究目标 7 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 研究对象 2004年7月－11月接受根治性手术切除的50例Ⅱ/Ⅲ期散发性大肠癌患者的原发病灶 初治患者 明确的术后病理诊断 术前未行放化疗 无任何肿瘤家族史 术后半小时内新鲜取材 8 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 研究方法－免疫组化检测（IHC） 检测指标：k-ras、APC、p53、BAX、TGFβRⅡ IHC结果的判断标准 肿瘤细胞胞浆（k-ras、APC、Bax、TGFβRⅡ）或胞核（p53 ）染色阳性者所占比例≥10％为阳性 腺癌，癌组织APC阳性表达，定位于细胞浆 9 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 研究方法－流式细胞仪检测（FCM） 倍体分析的判断标准 DNA指数（DI）＝肿瘤细胞的G0/1峰均道值 /正常细胞的G0/1峰均道值 二倍体（DI＝1）和异倍体（DI≠1） 异倍体者定义为CIN（＋） 二倍体 异倍体 10 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 检测位点：BAT25、BAT26 MSI的判断标准 微卫星位点阴性：主峰（单一峰型） 微卫星位点阳性：主峰＋新生峰 MSI（＋）： 2个位点中任意一个出现阳性结果 MSI（－） MSI（＋） 研究方法－ 微卫星不稳定（MSI）检测 11 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 研究方法－甲基化特异性PCR（MSP） 检测位点： p14 、hMLH1、p16、MGMT和MINT1 MSP反应结果的判断标准 未甲基化：PCR产物电泳时只出现未甲基化条带 甲基化： PCR产物电泳时出现甲基化条带，无论是否出现未甲基化条带 CIMP（＋） ：≥3/5个位点同时出现甲基化条带 12 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 SPSS11.5软件 生存分析： 寿命表法：计算无疾病生存（DFS） 单因素分析：Kaplan-Meier法 多因素分析：Cox回归法 检验标准：P 0.05 统计学分析 13 22/05/2010 第六届中国肿瘤学术大会 －蔡国响 性别：男性23例，女性27例。 年龄：平均54.54 ± 11.76岁（22-80岁）。 部位：结肠癌18例，直肠癌32例。 肿瘤最大径