酶联免疫吸附试验.pptVIP

医学检验实验教学中心 实验项目 酶联免疫吸附试验 实验目的 通过临床标本HBsAg的检测，使学生掌握酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原的原理、方法。 通过引导学生分析、讨论HBsAg的临床意义，培养学生分析和解决问题的能力。 通过介绍临床自动化仪器，开拓学生视野。 酶联免疫吸附试验原理 酶联免疫吸附试验原理 酶联免疫吸附试验类型和原理 酶联免疫吸附试验原理 提出问题、学生思考 1.临床怀疑乙型肝炎病毒感染的病人，应该检测哪种免疫学指标？ 如果采用ELISA，应该选择哪种类型的ELISA检测？ 试剂与器材 试剂 1.酶标抗体:HRP-抗HBs 2.抗HBs,待检血清,阳性和阴性对照血清 3洗涤液：Tris—HCL---Tween20 4辣根过氧化物酶底物液：TMB-过氧化氢尿素溶液 5终止液：H2SO4 试剂与器材 器材 酶标板微量反应板 试剂与器材 操作方法 1 包被 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24小时。 操作方法 1 包被 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24小时。 操作方法 1 包被 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24小时。 操作方法 2 洗涤 弃去空中液体，洗涤液洗3次，每次1分钟。吸水纸拍干。 操作方法 3 加待检样品 各孔加待检血清0.1mL，同时做阳性对照，阴性对照，空白对照。37 ℃ 60分钟。 操作方法 3 加待检样品 各孔加待检血清0.1mL，同时做阳性对照，阴性对照，空白对照。37 ℃ 60分钟。 操作方法 4 洗涤 弃去空中液体，洗涤液洗3次，每次1分钟。吸水纸拍干。 操作方法 5 加酶标抗体 各孔加HRP-抗HBs-IgG 0.1mL.37 ℃ 60分钟。 操作方法 6 洗涤 弃去空中液体，洗涤液洗3次，每次1分钟。吸水纸拍干。 操作方法 7 加底物液 各孔加底物液0.1mL.置黑暗10-20分钟。 操作方法 8 终止反应 各孔加终止液0.05mL，终止反应。 结果判定 目测法 阳性孔呈桔黄色，阴性孔无色或极浅黄色 结果判定 比色法 用酶标分光光度计测A492nm，计算P/N值。 P/N值：待检血清A492nm—空白对照A492nm/阴性对照A492nm—空白对照A492nm P/N≥2.1,结果为阳性。否则为阴性。 讨论 方法评价 简便，敏感，特异。 临床意义 HBsAg阳性可见于急性肝炎的潜伏期和急性期。 慢性活动性肝炎，重症肝炎，无症状携带者，肝硬化，原发性肝癌。 注意事项 注意RF的干扰。 标本应无溶血。 自动化酶标分光光度计介绍 * * 双抗体夹心法检测原理 竞争法检测原理 改良竞争法检测原理 捕获法检测原理 器材 酶免分析仪-样品架 → → → → → 酶免分析仪-温箱育 酶免分析仪-XY架头 酶免分析仪-吸液管