输血相关传染病的检测技术概述课件-平凉中心血站.pptVIP

输血相关传染病检测技术概 述 甘肃省平凉市中心血站实验室 吴 宏 涛 输血相关传染病种类 病毒性肝炎 乙、丙、丁、庚型肝炎 艾滋病 梅毒 巨细胞病毒 EBV感染 HTLV感染（美国、欧盟及我国的厦门血站开展） 疟疾 弓形体病等 输血相关传染病检测方法 酶联免疫吸附试验ELISA* 免疫荧光法IFA 放射免疫法RIA 免疫印迹法WB* 重组免疫印迹法RIBA 颗粒凝集实验PA 病毒检测VT 病毒核酸检测NAT* 酶联免疫吸附试验ELISA 建于1971年。开创了运用酶标记免疫技术进行液体标本中微量物质的测定，是检验医学的里程碑式的发展。 特点：敏感性高，特异性强，操作简便，即可测定抗原，也可测定抗体。 类型：间接法，直接法，双抗体夹心法，竞争抑制法或竞争法。 免疫荧光法IFA 荧光抗体技术 荧光抗原技术 原理： 以特异抗原抗体反应为基础，利用荧光素作为标记物标记已知抗原（或抗体），在一定条件下与被测标本中相应的抗体（或抗原）结合，形成抗原抗体复合物，此时荧光素起示踪物作用。再通过有紫外光源的荧光显微镜就可以辨认出特异性抗原抗体复合物的存在。 放射免疫法RIA 一种用放射性同位素为标记物的免疫学测定方法，具有很高的敏感性与特异性。其原理与ELISA大致相同，所不同的是用放射性同位素为标记物而不是用酶为标记物。 免疫印迹试验WB 又名蛋白印迹试验，其原理是在病毒裂解后将不同分子量的病毒蛋白经十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙烯胺凝胶电泳（PAGE）分离后，经过电转移将凝胶上的蛋白条带转移到位硝酸纤维素膜上，以此作为抗原进行病毒特异性抗体检测。 重组免疫印迹试验RIBA 原理：应用重组蛋白或合成肽（而不是直接应用病毒裂解的蛋白）以条带形式吸附在硝酸纤维素膜条上，当条上加入被测血清标本温育后，如果标本中含有特异性抗体时，则和相应抗原带结合形成抗原抗体复合物。通过洗涤，去掉未结合的血清，然后加入酶标IgG二抗，再温育，则酶结合物就结合到抗原抗体复合物上，再洗涤，加入底物。 颗粒凝集试验PA 是一种简便快速的筛检试验，其原理为病毒裂解物或重组抗原包被于颗粒载体（红细胞，乳胶颗粒，明胶颗粒），使之成为致敏颗粒，再加入血清标本，如被测血清中含有特异性抗体，则因抗体与抗原间桥联作用，使致敏颗粒发生凝集。 病毒检测VT 可通过病毒的分离和培养后进行。培养可通过动物培养，鸡胚培养和细胞培养进行，其中以细胞培养方法最敏感、经济和最有前途。病毒感染细胞后，多数病毒能引起病变，可直接镜检观察，或通过血清学检查作出鉴定。 病毒的核酸检测NAT 病毒核酸分子杂交 聚合酶链反应PCR 乙型肝炎的检测技术 1 乙肝病毒的生物学性状 形态与结构 基因结构与复制方式 抗原组成 动物模型与细胞培养 抵抗力 1.1 HBV形态与结构 HBV结构为双层球形，直径42nm，具有双层衣壳。 1.2 HBV基因结构与复制方式 HBV的DNA基因较小，仅含约3200个核苷酸，负股DNA核苷酸序列含有4个开放读码框架（OPR）分别称为S、C、P和X区。 基因及其编码的抗原： S区基因 C区基因 P区基因 X区基因 S基因→HBsAg C基因→ HBcAg ↓ ↓ 前S1 →Pre-S1 前C基因 → HBeAg DNA多聚酶 HBXAg 前S2基因→Pre-S2 1.3 HBV抗原的组成 表面抗原HBsAg 三种形态 小球型颗粒、管形颗粒、Dane颗粒 亚型 各亚型均有共同抗原决定簇，称为a抗原，此外还有2组相互排斥的亚型抗原决定簇（d/y和w/r）。按不同的组合方式构成HBsAg四个基本亚型，即adr,adw,adr,ayw。亚型的分布有明显的地区差异和种族相关性，汉族以adr，少数民族为ayw，欧美以adw占优势，ayw主要分布在北非和西非。乙肝ELISA诊断试剂的标准要求adr,adw, ayw三个亚型的最小检出量为0.5ng/L。 核心抗原HBcAg 为内衣壳部分，不易在血循环中检测，抗原性强。 e抗原HBeAg 病毒复制和具有强感染性的指标。 1.4 HBV动物模型与细胞培养 黑猩猩是对HBV最敏感的动物。 目前采用的细胞培养系统是病毒DNA传染系统。将病毒DNA导入肝癌等细胞后，病毒可整合并复制，在细胞中表达HBV抗原。 1.5 HBV抵抗力 HBV 的抵抗力较强，在30℃-32℃可存活6个月，在-20℃可存活15年，对低温、干燥、紫外线均有耐受。不能被70%乙醇灭活，因此不能用这一常规方法来消毒。但65℃10 小时