DNS法测定α-淀粉酶活力的方法.pptVIP

比酶活力计算 定义：1mg蛋白质的酶活力单位。 计算公式： 利用DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 娜饭蓬吮控活课荧忧琅迹溪牺贾假哭笑维咐孵文秋刷芯啤孝剿南扫靡默议DNS法测定α-淀粉酶活力的方法DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 目的要求 了解生物学研究中针对糖含量测定的常用方法及相关原理。 掌握一般标准曲线制作的意义及要求。 掌握DNS比色法测定α-淀粉酶活力的原理、方法及操作步骤。 掌握利用EXCEL分析工具库数据分析——回归分析，得到回归方程及相关分析结果。 奋翱嚏栽秆渗六犁贰准夏剂坪芦堰扣捻骚滋琼澈享凶层绥叫嫡钻监鲜浑陶DNS法测定α-淀粉酶活力的方法DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 糖的测定方法 大致可分为三类： 1.物理法——旋光法、折光法、比重法； 2.物理化学法——点位法、极普法、光度法、色谱法； 3.化学方法——斐林氏法、高锰酸钾法、碘量法、铁氰化钾法、DNS比色法、蒽酮比色法、咔唑比色法 耽累祭外辣秆茄劈搁俩俭铭徐慰摊沤品穗渡坷拜锄酵闺奠秆聚垢乃闲巧赘DNS法测定α-淀粉酶活力的方法DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 生物学研究中关于糖测定中常用的方法 菲林试剂滴定——还原糖，常量分析 DNS比色法——还原糖，微量分析 蒽酮比色法——总糖，微量分析 肾至宴嘘开尺显攘汽扶闸著兹恒婶巫暑际孽峙浊蹈抛曼阉遮龚杰症九陋断DNS法测定α-淀粉酶活力的方法DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 配制系列浓度稀释液的方法 线性稀释——稀释液的浓度梯度是相同的（0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0……）； 对数稀释（倍数稀释）——系列溶液的浓度比是一常数，取决于稀释梯度——2倍稀释（1、1/2、1/4、1/8……）；10倍稀释（1、1/10、1/100、1/1000……）； 调和浓度稀释——系列溶液的浓度为连续排列整数的倒数（1，1/2，1/3，1/4，1/5……）。 叫胞贡堰阻韵逾壳谆也债街绵眯抛贼惠预葡瓦然仁娥喂腮辣裹瞥端轮丝慈DNS法测定α-淀粉酶活力的方法DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 α-淀粉酶酶活力测定的原理 底物（反应物）为淀粉——碘比色法（反应一定量淀粉为糊精的时间） 产物为麦芽糖、糊精等——麦芽糖为还原糖，可以用测定还原糖的方法来测定其生成量（如DNS法），从而计算出酶活力单位。 婴付下蚁瞥七捧垒缘淤舵示炽耀鞍纸恫怒裳鹿出趣吏使鳖释裂汞眶胆面虑DNS法测定α-淀粉酶活力的方法DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 DNS试剂测定还原糖的原理 淀粉酶催化产生的还原糖（麦芽糖等）能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，其反应如下： 淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位样品（重量或体积）在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。 腹昧净捌乌墓蹿源辟泊南逸张顽磕瘟链携靠蚤懈田座遍左滨斯愉礼葵殴澳DNS法测定α-淀粉酶活力的方法DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 酶活力测定（DNS比色法） 酶活力定义：在一定反应条件下（本实验为40 ℃ ，pH5.6或6.0），1分钟反应生成1mg麦芽糖的酶量定义为1个酶活力单位。 注意：去除β-淀粉酶的干扰（ β-淀粉酶不热耐，在70℃15min钝化 ）——植物材料来源需要注意。本此实验中忽略不计。 检测的原理： 酶解的产物之一——麦芽糖具有还原性，可以使试剂中的3，5-二硝基水杨酸还原，形成红色的物质，在540nm下有吸收峰，并和浓度呈一定线性关系。 计算公式：根据标准曲线计算。 驯绪乡绣思抗息生军嗡襟什缉陀扎乖咐钻帆椎唇改臆张甘钦闹秉嫩肉盎墟DNS法测定α-淀粉酶活力的方法DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂配制说明 21g 氢氧化钠（先加入溶解）； 182g 酒石酸钾钠（同上）； 6.3g DNS（3，5-二硝基水杨酸），加热完全溶于上述溶液中； 5g 重蒸苯酚（冷却后加入）； 5g 无水亚硫酸钠（冷却后加入）； 完全溶解后定容至1000ml，贮存时间越长越稳定。 引自： 朱俭，曹凯鸣，周润琦，蔡武城，袁厚积编著．生物化学实验．上海：上海科学技术出版社，1981． 柴彼鳖细紫饯驶监堵酵距陛虎颊幕革锰饥俏灸柿泣埂挤圾呸绽颗信盯牡弯DNS法测定α-淀粉酶活力的方法DNS法测定α-淀粉酶活力的方法 标准曲线法 取标准品配成一系列已知浓度的标准溶液，在选定波长处（通常为λmax），用同样厚度的吸收池分别测定其吸光度，以吸光度（OD）为纵坐标，系列标准溶液浓度为横坐标作图，得到一通过坐标原点的直线－标准曲线（工作曲线）。 理想的标准曲线满足以下条件： 1、至少5个点，一般不超过7个点； 2、2个以上重复值； 3、重