栀子中京尼平苷的提取和分离纯化.pptVIP

* * 栀子中京尼平苷的提取和分离纯化 一、实验目的 1.掌握大孔吸附树脂柱层析分离化合物的原理和方法。 2.了解利用氧化镁吸附分离化合物的方法。 3.巩固薄层层析的操作技术。 二、基本原理 大孔吸附树脂是一种不含交换基团的、具有大孔结构的高分子吸附剂，也是一种亲脂性物质。利用大孔吸附树脂吸附极性较小的化合物而除去糖类等水溶性杂质，再通过梯度醇洗脱达到分离纯化的目的。 氧化镁是常用的吸附剂之一，利用吸附法对中药成分进行分离纯化有两种类型。一种是吸附要分离得到的物质，不吸附其他杂质；另—种是吸附杂质。本实验是利用氧化镁吸附所需物质，再用洗脱剂洗脱下来。 三、提取分离流程 四、操作要点 1.提取：取栀子粉100 g，置1000 ml圆底烧瓶中，加入200 ml石油醚回流提取0.5小时，抽滤。药渣加95%乙醇200 ml回流提取3次，每次30 min，合并提取液，减压回收乙醇得醇浸膏。浸膏用水浴60℃加热溶解，抽滤，滤液可用于做下面两个实验之一。 （1）大孔吸附树脂柱层析 预处理：取1.8cm×28 cm玻璃层析柱一根，称取25 g D101大孔吸附树脂，加水浸湿30 min，倒入柱中。用95％乙醇洗柱，至流出液加2倍水不浑浊为止，再用水洗柱除尽乙醇，备用。 上样：制备好的样品加入柱顶。 洗脱：先用水洗脱，流出液用molish反应检测糖类，至反应检测无糖类成分或显色很弱时，停止洗脱。再用20％乙醇、50％乙醇依次洗脱，molish反应呈阴性时更换洗脱液。减压浓缩收集的三个组分，并与标准品经TLC检测，京尼平苷主要集中于20％醇洗脱液中，即得京尼平苷浓缩液。另外，水中还有少量京尼平苷，50％乙醇洗脱液中则没有。 （2）氧化镁吸附 将滤液倒入蒸发皿中，加入氧化镁30 g，60℃水浴蒸干，得吸附有样品的氧化镁粉末。再将氧化镁装入层析柱中，用乙酸乙酯洗脱500 ml，减压回收溶剂，浓缩得京尼平苷粗品。在乙酸乙酯－丙酮（1:1）中重结晶得京尼平苷纯品。 ?硅胶薄层层析 展开剂：乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5:3:1:1 or 5:5:1:1） 显色剂：a.50％硫酸乙醇溶液； b.艾氏试剂：对二甲氨基苯甲醛0.25 g溶于50 g冰醋酸、5 g 85％磷酸和20 ml水中，棕色瓶保存。