1.1DNA重组技术的基本工具课件题库.pptVIP

基因工程 专题1 基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的新生物类型和产品 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 “分子手术刀”—— “分子缝合针”—— “分子运输车”—— 一、DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 运载体 （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 来源 种类 作用 识别序列 主要从原核生物中分离纯化出来 已从近300种微生物中分离出4000种限制酶 识别双链DNA的某种特定核苷酸序列， 并使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 EcoRI限制酶的切割： 中轴线 黏性末端 黏性末端 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 C C C G G G G G G C C C 中轴线 SmaI限制酶的切割： C C C G G G G G G C C C 平末端 平末端 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 寻根问底 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？ 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ DNA分子中不具备这种限制酶的识别序列，或者将识别序列的碱基进行了修饰，使限制酶不能识别。 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 作用 作用原理 类型 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA 催化磷酸二酯键形成 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 “分子手术刀”—限制性核酸内切酶 “分子手术刀”—限制性核酸内切酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板