微生物实验-放线菌形态观察与芽孢染色.ppt.pptVIP

实验考核办法： 1、平时成绩占70%，期末卷面成绩占30%。 2、每次实验课预习报告占30分，实验操作占50分，结果与讨论（实验报告）占20分；∑实验得分/9，为平时成绩。 3、出现安全责任事故，实验课成绩记为不及格；无故缺课一次，本次实验为零分；迟到或早退一次，扣20分；逃避值日或实验后未整理实验台，扣20分；喧哗、接听手机、随意走动，扣10分。 实验三 、放线菌形态观察与芽孢染色 一、实验目的 1、学习并掌握观察放线菌形态的基本方法 2、初步了解放线菌的形态结构 3、学习并掌握细菌芽孢染色法 二、实验原理 放线菌为单细胞多分枝的丝状体，生长在培养基内的菌丝称基内菌丝（营养菌丝），长出培养基外伸向空间的菌丝称气生菌丝。气生菌丝生长到一定阶段由顶端分化成孢子丝，孢子丝的形状因菌种的不同而异，有直线形、波浪形、螺旋形。孢子丝断裂后产生成串或单个的分生孢子，孢子常呈圆形、椭圆形或杆状。本实验采用印片法对放线菌进行形态观察。 芽孢染色是利用细菌的芽孢和菌体对染料亲合力的不同，用不同的染料进行着色，从而使菌体和芽孢呈现不同的颜色。由于细菌的芽孢壁厚而致密、透性低，着色和脱色均困难。因而需在加热的条件下，用着色力强的染料促进标本着色，进入菌体的染料经水洗可脱去，而进入芽孢内的染料难以透出，仍然保留，经复染后，菌体和芽孢即可分别呈现出不同的颜色。 三、实验材料 1、细黄放线菌或灰色链霉菌的固体平板。 2、培养24～36小时的巨大芽孢杆菌。 3、培养皿，盖玻片，显微镜，各种染料等。 四、实验内容 （一）放线菌形态的观察（印片法） 印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察，这种方法主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等。 1、制片：取一干净载玻片，按无菌操作要求，用尖头镊子从培养平板上连同培养基挑取一块完整的菌种块，表明朝上，置于载玻片中央；另取一干净载玻片，在菌种块上轻轻按压（不要压碎），同时注意不要移动位置，以免印痕模糊，影响观察。 2、固定：将印好的载玻片翻转，通过火焰加热固定。 3、染色：用复红染色1分钟，水洗风干。 4、镜检：先用低倍镜观察，后换用油镜观察气生菌丝、孢子丝和孢子等结构。 5、绘出放线菌形态图。 放线菌结构形态 （二）细菌芽孢染色（孔雀绿－番红染色） 1、按照无菌操作要求，取少许培养物，制成涂片，干燥，固定。 2、滴加孔雀绿染色液于涂片，用试管夹夹住载玻片一端，在酒精灯上文火加热至燃料冒蒸汽时开始计时，染色8～10分钟。在加热过程中要随时添加染料，要注意勿使染料沸腾或玻片干涸。 3、倾去染料，待玻片冷却后，用水冲洗至无绿色褪下后，滴加番红染色液，室温下染色3～5分钟，水洗，完全干燥。 4、油镜下观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色，注意芽孢的大小、形状及位置。 细菌芽孢形态 五、实验报告 1、绘出所观察到的放线菌的主要形态特征。 2、印片标本制作过程中应注意那些事项？ 3、绘出所观察到的细菌芽孢形态，并注明芽孢及菌体的颜色。 4、列出芽孢染色过程中的注意事项。 * * 生命科学学院微生物学系 电话：8242908 孢子丝 气生菌丝 营养菌丝 气生菌丝 孢子丝 分生孢子 固氮菌芽孢 磷细菌芽孢 钾细菌芽孢