第十章：基因和蛋白质工程题库.ppt

四、聚合酶链式反应（PCR） 1985年Mullis发明PCR（ polymerase chain reaction）快速扩增DNA的方法。该法模仿体内DNA的复制过程，首先使DNA变性，两条链解开，然后使引物模板退火，二者碱基配对，DNA聚合酶随即以4种dNTP为底物，在引物的引导下合成与模板互补的DNA新链。重复此过程，DNA以指数方式扩增。扩增的公式为: Y=(1+X)n 式中 y一产量; X--扩增效率; n一循环次数。 （2） PCR的应用 （1）PCR的原理 PCR技术原理示意图 靶序列 变性和引物复姓 循环1 循环2 循环3 变性和引物复姓 链延伸 Tag酶 链延伸 PCR技术的发展与应用 ?用于合成特异探针； ?用于DNA的测序； ? 将逆转录与PCR相偶联 （RT-PCR）； ?用于基因定位诱变； ?末知序列的PCR扩增； ?基因组序列的比较研究； ?用于临床诊断。 DNA芯片(DNA chip)技术是采用寡核苷酸原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针片段有序地固化于支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，反应结果通过检测杂交信号的方法（同位素法、化学荧光法、化学发光法或酶标法）显示，再用精密的扫描仪或CCD摄象技术记录，通过计算机软件分析，综合成可读的IC总信息，来实现对生物样品的快速、并行、高效地检测或诊断。 芯片分析实际上也是传感器分析的组合。芯片阵列中的每一个单元微点都是一个传感器的探头，所以传感器技术的精髓往往都被用于芯片的发展。阵列检测可以大大提高检测效率，减少工作量，增加可比性，所以芯片技术也是传感器技术的发展。 DNA芯片技术简介 DVA芯片工作示意图 emission Laser 1 Laser 2 computer analysis DNA clones test reverse transcription Label with fluor dyes PCR amplification purfication hybridize target to microarray robotic printing reference 第十章 基因工程和蛋白质工程简介 第一节 DNA重组与基因工程 第二节 蛋白质工程简介 第三节 核酸研究技术简介 返回 第一节 DNA重组和基因工程 基因工程亦称遗传工程，即利用DNA重组技术的方法，把DNA作为组件，在细胞外将一种外源DNA（目的基因）和载体DNA重新组合连接（重组），最后将重组体转入宿主细胞，使外源基因DNA在宿主细胞中，随细胞的繁殖而增殖（cloning，克隆），或最后得到表达，最终获得基因表达产物或改变生物原有的遗传性状。 一、DNA重组的技术路线 二、基因工程的应用与前景 三、DNA体外重组常用的酶 DNA重组的 技术路线 Foreign DNA to be inserted Plansmid vector Joining Recombinant DNA molecule Introduction into host cells by transformation of viral infection Host chromateme Slection for cells coteining a recombinant DNA molecule Cloning + 1、目的基因的制备2、载体的构建3、目的基因与载体的重组4、重组 体导入宿主细胞进行扩增5、克隆基因的鉴定 Ti质粒结构 植物冠瘿瘤 pBR322质粒的结构 以?噬菌体为载体进行DNA克隆 ?DNA 用限制性内切酶除去中间一段 与外源DNA连接 重组载体的体外包装 带有外源DNA的?噬菌体 太小不能被包装 头部前体 多联体DNA A蛋白 COS COS COS 成熟的颗粒 在宿主细胞内进行DNA的装配过程 ?噬菌体感染大肠杆菌的途径 DNA重组体的筛选 ? 载体特征的直接筛选 ? 菌落的原位杂交 ? 免疫学方法 pBR322质粒结构 如果外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因失活 如果外源DNA插入，四环素抗性基因失活 原位杂交法筛选DNA重组体图解 复印至硝酸纤维素膜上 用N