细胞及细胞工程实验要点.docxVIP

实验一细胞的凝集反应实验目的了解细胞膜的表面结构；实验原理凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。实验用品1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架2 ．材料: 土豆块茎、 2％鸡血红细胞3 ．试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。实验步骤1２％鸡血红细胞悬液制备取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５ min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。2 土豆凝集素制备土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min）3 细胞凝集反应制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管中加入0.5ml生理盐水，混合均匀并编号1%；在1%的试管中取0.5ml的细胞悬液于另一只试管中，并加入0.5ml的生理盐水，混合均匀编号0.5%；梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：取1ml的土豆凝集素悬浮液原液于其中一只试管中，并编号1×；另取0.5ml的土豆悬浮液原液于另一只试管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，并编号0.5×；再取一只试管，加入1ml的PBS缓冲液，并编号0×；土豆凝集素１滴、２％鸡血红细胞液１滴载玻片上混匀，静置２０min（写实际时间，5min）思考题：生理盐水可以用蒸馏水代替吗？为什么？不能用蒸馏水代替。生理盐水的渗透压与血浆的渗透压相当，用生理盐水是为了维持渗透压，保持细胞正常形态,防止发生细胞破裂。如果你在显微观察时，看到很多碎片状小块发生凝集，而不是圆形的细胞，请分析可能导致这种现象的原因可能是盖玻片压片时细胞破碎实验二 MS培养基的配制一、实验目的了解MS培养基的组成、掌握MS培养基的配制方法二、实验原理植物生长发育需要多种营养成分，在配制之前，将各种成分按要求的比例，先配制成一定浓度的母液，方便保存和操作实验用品各种试剂天平、高压灭菌锅、电炉、烧杯、pH试纸、容量瓶、量筒、移液管实验步骤1、配制几种母液（1）配制MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。分别称取名称重量名称重量NH4NO3165gKH2PO417gKNO3190gCaCl2·2H2O44gMgSO4·7H2O37g各自配成1L的母液。各自倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。（2）配制MS微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）名称重量名称重量KI0.083gNa2MoO4·2H2O0.025gH3BO30.62gCuSO4·5H2O0.0025gMnSO4·H2O1.69gCoCl2·6H2O0.0025gZnSO4·7H2O0.86g配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。注：CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。分别称取CuSO4·5H2O 0.05g，CoCl2·6H2O 0.05g，各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。（3）配制MS有机母液一般配制成100倍MS有机母液。依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）名称重量名称重量肌醇10g盐酸硫胺素（VB1）0.01g烟酸0.05g甘氨酸0.2g盐酸吡哆醇（VB6）0.05g配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。（4）激素母液的配制各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。2、配制培养基以配置1L MS培养基为例，按顺序进行如下操作：1）. 先在烧杯中放入一些蒸馏水。2）. 分别取上面八种母液10ml倒入。3）. 一般称取30g蔗糖倒入，搅拌溶解。4）. 加蒸馏水用量筒定溶至1L。5）. 按设计好的方案添加各种激素，由于激素的用量很小，而且激素对组培植物的生长至关重要。所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取，减少误差。用精密试纸或酸度计调整PH至5.7-5.8。（有条件的话使用酸度计，比较精确）可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值。①当量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。②当量NaOH配制：称取Na