1.1DNA重组技术的基本工具(新)幻灯片.pptVIP

选修3 生态工程 生物技术的安全性 和伦理问题 胚胎工程 细胞工程 基因工程 现代生物科技 专题 专题1.基因工程 基因工程的概念 1.1 基因工程的基本工具 1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程的发展史 1.3 基因工程的应用 1.4 蛋白质工程的崛起 基因工程的产物—转基因动植物 别称： 操作环境： 原理： 操作水平： 结果： 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术或基因拼接技术。 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的生物类型和生物产品。 基因工程的概念： 普通棉花 　　 转基因抗虫棉 1.1 基因工程的基本工具 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫基因) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 转基因抗虫棉花植株 要获得转基因抗虫棉，至少需要三种工具： “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 载体（运载体） 1、简称： 2、来源： 3、种类： ?? 4、特点: 一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀” 主要在原核生物中 限制酶 约4000多种 专一性、特异性；识别双链DNA的特定核苷酸序列；切割特定切点 脱氧核苷酸之间的 脱氧核苷酸内的 切割的是磷酸二酯键而不是氢键 思考与探究 P7 2、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，含有某种限制酶的细菌细胞，细菌DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 EcoRⅠ （在G与A之间切割） SmaⅠ （在G与C之间切割） Hind Ⅲ （在A与A之间切割） G A A T T C C T T A A G C C C G G G G G G C C C A A G C T T T T C G A A 中轴线 专一性：DNA双链的特定序列，并在特定位点切割 限制酶作用特性： 一般，识别的DNA双链序列呈中心对称（在平面内旋转180度后序列不变）（回文序列：上面序列正着读，和下面序列反着读，序列一样） GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG 限制酶的识别序列一般是回文结构序列： 切割结果：产生粘性末端或平末端 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 注意：氢键自动断开 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，称为黏性末端。 注意：同一限制酶切出的黏性末端相同；在平面内旋转180度 SmaⅠ 平末端　　　平末端 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 1、作用: 把具有相同黏性末端的双链DNA片段，或者任何具有平末端的双链DNA片段，拼接成新的DNA。 2、作用原理： 催化末端碱基互补的DNA片段之间形成磷酸二酯键。 不是氢键，氢键自动形成。 二、 DNA连接酶 ——“分子缝合针” 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4 DNA连接酶 或 E.