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第十四章　微生态制剂 一、概述 人和动物的生存，与生存环境相互依赖、相互制约，其生存环境包括两种： 一是外环境（宏观生态），研究生物与生物、生物与外环境的相互依赖和相互制约的科学－－宏观生态学 一是内环境（微观生态），研究动物体内正常微生物群与其宿主相互关系的科学－－微生态学。 动物微生态学的研究内容主要包括口腔、胃肠道、泌尿生殖道和皮肤四个生态学领域。 微生态学的许多基本规律都是从胃肠道微生态学研究出来的。 动物出生时肠道内是无菌的，经2～4小时后即有大量细菌进入、定居井繁殖，这一过程称为细菌的定植（colonization） 正常菌群有以下几个特征： 　1．种类多，数量大：500，1012/g 2．厌氧菌占优：最多至1000：1 　3.　不断发生演替 　4．正常菌群的平衡是相对的 肠道正常菌群与机体免疫的关系 特异性免疫： 　　宿主对原籍菌不易产生抗体 　　对于外籍菌能产生特异性抗体 非特异性免疫： 　　刺激宿主的免疫机能成熟 胃肠道正常菌群对病原菌的作用 一个安定的、完整的、处于生态平衡的正常菌群，对病原菌有明显的生物颉颃作用 　　过氧化氢的作用 　　杀细菌素和抗生素的作用 　　有机酸的作用 　　占位性保护作用 　　争夺营养的作用 二、微生态制剂的概念和应用 微生态制剂英文“probiotics”，来源于古希腊语，意为“for life”，有人翻译为“益生素”，但多数人仍称之为“微生态制剂”、“活菌制剂”或“生菌剂”。 是用非病原性微生物，如乳酸杆菌、醋样芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌或双歧杆菌等活菌制剂，口服治疗动物正常菌群失调引起的腹泻。 已在临床上应用并用于饲料添加剂。 微生态制剂（probiotics） 几千年前人们食用发酵乳的习惯，就是一种简单的微生态制剂雏型。 20世纪20年代，再次兴起了研究肠道正常菌群的热潮 人们对抗生素被作为治疗剂和生长促进剂使用所引起的副作用的担忧 很多国家已经采取措施限制抗生素作为饲料添加剂的应用 微生态制剂填补这个空白。 有效的微生态制剂应具备的特性 能够规模化生产的活性制品 在贮存条件和田间条件下能较长期存活并保持稳定 在肠道中具有存活能力（不一定要增殖） 在宿主动物体内应能产生积极作用 微生态制剂在动物体内的作用 提高动物生长率 改善食物的利用 提高奶牛的产乳量 增加产蛋量 改善健康状况 微生态制剂在医学临床上的应用 婴幼儿和动物保健 清理肠道 治疗创伤感染 抗衰老 其它 ：剂降低体内胆固醇水平；治疗由血氨过高引起的肝昏迷；预防癌症和治疗癌症 等 三、微生态制剂的生产 微生态制剂可使用一株或几株细菌制成不同的剂型 粉剂、片剂和菌悬液 直接口服、拌料或溶于水中 ，雏鸡喷雾 微生态制剂的严格概念系指利用有生命的菌群 灭活菌体或细菌培养代谢物同样具有微生态制剂的作用 微生态制剂的生产 菌种选择：首选GRAS菌（公认的安全菌，generally recognizedas safe） 制品的活力和纯粹检查 生产微生态制剂的菌种 ，选择批准的，或研究新的 我国批准生产的微生态制剂 我国批准作为饲料药物添加剂使用的微生态制剂包括： 嗜酸乳杆菌、蜡样芽孢杆菌、 枯草杆菌（只限于不产生耐抗生素的菌株） 粪链球菌、噬菌蛭弧菌、 嗜酸乳杆菌＋粪链球菌＋枯草杆菌、 脆弱拟杆菌＋粪链球菌＋蜡样芽孢杆菌， 酵母菌等 需氧芽孢杆菌制剂的生产方法 产生芽孢，对高温的耐受力强，因而适于制成各种剂型，菌存率高，保存期长 培养基：黄豆芽汤、黄豆汤、蛋白胨水、普通肉汤、0．1％葡萄糖肉汤 液体通气培养或固体培养法 菌液：通气培养18～24小时，芽孢形成率就能达到90％以上，收获菌液 离心浓缩（或40～50℃烘干），加赋形剂 ， 赋形剂可选用医用淀粉、碳酸钙粉、食用淀粉、玉米粉等 用量：5 000万个芽孢 / kg体重 乳杆菌（Lactobacillus）制剂的生产要点 培养：脱脂乳、乳清汤、酵母膏汤等 浓缩：以冻干方法干燥后再与淀粉混合制成粉剂，或以冻干粉末与预先制成颗粒的淀粉一起进行压片 双歧杆菌制剂的生产要点 双歧杆菌（Bifidbacterium）出生后2天开始定植, 专性厌氧菌，最低生长温度25～28℃，最高生长温度43～45℃，适宜生长温度为37～41℃，适宜pH7．0 培养基：心脑浸液（BHI）、BLb琼脂、改良BS琼脂 拟杆菌制剂的生产要点 拟杆菌（Bacteroides）是寄生在人和动物肠道的、革兰氏阴性厌氧杆菌中占第一位的正常菌 培养：牛奶培养基上厌氧培养（定时通入氮气和二氧化碳连续搅拌）， 制剂：将菌液抽滤得到菌泥，加入赋型剂得到菌粉即为制剂。 每克菌粉含拟杆菌100万个