12.18细胞色素P450酶系辩析.pptVIP

细胞色素P450酶系 孙婉菊 2014年12月17日 1.细胞色素P450酶系概述 细胞色素P450单加氧酶系(cytochrome P450 monooxygenases，P450s) ： NAD(P)H-细胞色素P450还原酶 (CPR) 细胞色素P450单加氧酶 (CYP) 2个组分均通过疏水的膜结合锚点结合在微粒体膜上。 CYP450 广泛分布在动物、植物、低等真核生物和细菌体内，在同种生物的不同组织中都存在，是自然界中含量最丰富、底物谱最广的催化酶系。 NADPH-细胞色素P450 还原酶 NADPH-细胞色素P450还原酶是一种以FAD和FMN作为辅基的细胞微粒体复合黄素蛋白； CYP450是以硫醇盐结合血红素为活性中心催化氧原子转移的氧化还原酶，氧由亚铁血红素（HEME）来活化。 CPR是CYP的主要电子供体，电子传递给CYP之后，CYP才能与底物发生氧化还原反应，发挥代谢活性，CPR与CYP的电子传递反应是CYP氧化还原反应的限速步骤 。 2.Human and Microbial CYPs Human CYPs Humans contain 57 CYPs mitochond rial CYPs: CYP11A1、CYP11B1、CYP11B2 microsomal CYPs: CYP17A1、CYP19A1、CYP21A1 Six P450 enzymes are involved in steroidogenesis In human adrenal P450s been intensively studied in steroid synthesis. In bacteria, the P450s are used in catabolic pathways for the production of steroids, bioactive lipids and chiral synthons. Microbial CYPs Actinomycetes Mycobacterium smegmatis (39 P450s) Mycobacterium tuberculosis (20 P450s) Streptomyces coelicolor (18 P450s) 3.甾体羟化反应 甾体羟化酶大都是细胞色素P450依赖型单加氧酶，属于末端氧化酶，能将一摩尔分子氧引入底物，通过NADPH递氢，完成羟化反应。 RH + NADPH + O2 ROH + NADP+ + OH- Steroidogenesis 细胞色素P450酶系羟化反应主要有：9α羟化、11α羟化、11β羟化、16α羟化、17α羟化和19α羟化等。 甾体化合物分子中11-羟基的引入在甾体药物化学中占极为重要的地位。 Towards Preparative Scale Steroid Hydroxylation with Cytochrome P450 Monooxygenase CYP106A2 1.CYP106A2 from Bacillus megaterium ATCC 13368, enables the oxidation of 3-keto-4-ene steroids mainly at position 15. 2.We expressed this enzyme together with the electron-transfer partners bovine adrenodoxin and adrenodoxin reductase in Escherichia coli. 3.An enzyme-coupled cofactor regeneration system was implemented by expressing alcohol dehydrogenase from Lactobacillus brevis。 eg1 Cloning pBAR Twin: bovine AdR、Adx pACYC FHH28: CYP106A2 pBAR Tripel: bovine AdR、AdX、LbADH Selectivity of CYP106A2 With growing cells as a biocatalyst, a limited selectivity of both Prog and Tes hyd