基因工程抗体 - 副本_课件.pptVIP

抗体库的富集筛选 第一:淘选的高效率使得在极低的存在水平下, 挑选到高亲和力噬菌体成为可能; 第二: 所挑选到的噬菌体可在微量存在的情況下, 通过感染细菌得到富集; 第三: 展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体内部的基因密码的连接, 使得结合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。 噬菌体抗体库优势 单克隆抗体 噬菌体抗体 杂交瘤技术 展示技术 宿主细胞: 杂交瘤 细菌 筛选范围 : ~103 107?109 时间: 几个月 几周 操作: 繁杂 相对简单 免疫: 必须 可避免 人源抗体: ? + 费用: 高 低 生产量: 有限 无限 基因获取: 再克隆 直接 应用前景: 有限 不可估 噬菌体抗体库的不足 库容量及多样性问题目前构建大容量库容的主要限制因素是细菌转化率,用目前有效的电穿孔法可构建到 108 的库容,则最终形成的抗体库在理论上具有 108 ×108 =1016的潜力 。Griff 用这种方法构建了库容为 6. 5 ×1010抗体库 。 亲和力高的抗体分子不易洗脱 抗体分子表达对宿主菌有毒性，抑制宿主菌生长 核糖体展示抗体库 核糖体展示技术(ribosome display),克服了体内筛选技术对库容的限制,操作简单，是第一种完全在体外筛选和呈示功能蛋白的方法。 不经转化,可以进行超大容量蛋白库的构建和筛选 。 核糖体展示技术原理 基因工程抗体优缺点 优点： 不受动物品系(species)和抗体类型(isotype)的限制 利用嵌合抗体，使鼠源抗体人源化，减少潜在的抗原表位，增强抗体疗效 全人源化抗体，可以降低抗体的异源性和免疫源性，最大化提升抗体的疗效 缺点： 抗体的亲和力弱，与完整抗体结构相比功能明显降低 FDA近三年批准的抗体类药物 截至2015年上半年，FDA已批准超过40种抗体药物。 抗体药物改造的方向 抗体人源化和人源抗体制备 改变抗体分子大小 增强抗体亲和力 增强抗体效应功能 今后抗体药物发展的方向 寻找新的靶抗原 基于抗原立体结构设计抗体 基于抗原-抗体相互作用设计小分子抗体模拟物 最理想的单克隆抗体 100%人源 人类免疫系统自然产生 未来单抗开发的完美方案 从已知治疗靶子生产高亲和力全人抗体 全人抗体靶分子的筛选 开发未知抗原的治疗用抗体 展望 基因工程抗体的发展已使抗体制备技术进入了一个全新的时代,此项技术已广泛深入到生物医学中的许多领域,尤其是噬菌体抗体库技术的建立, 使得不经过免疫 、利用抗原直接从库中筛选特异性抗体成为可能,使抗体的制备变得简单易行,稳定有效 ,使人源抗体的制备有了突破 ,这是抗体工程领域的重大进展。这极大地推动了各种性能优良抗体及多功能抗体融合蛋白的开发和应用,而且在蛋白质纯化工程中也有广阔的应用前景。随着分子生物学 、分子免疫学的发展及噬菌体抗体库技术的成熟,人们可以根据需要改造和制备各种人和动物用抗体。可以预见 ,一个随意定向地制造抗体的时代即将到来。 * “ ” 基因工程抗体 陆宇豪 2015.11.26 理想的抗体药物的性质 高特异性和高亲和力 对人没有免疫原性，不诱导机体对抗体的排斥反应 游离抗体不激活补体 一旦结合到靶抗原上，能诱导效应功能 细胞系稳定，适合在无血清培养基中进行 大规模培养 抗体符合生物制品标准 抗体技术的发展经历了三个阶段 第一代：多克隆抗血清 第二代：细胞工程抗体 第三代：基因工程抗体 单克隆抗体用于治疗存在的问题 1、单克隆抗体的特异性 由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某特定抗原表位的抗体 2、异种抗体反应（H