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卵磷脂等物质对红细胞膜的保护作用研究 北京工商大学嘉华学院 广告082班 摘要： 在离体条件下，研究卵磷脂溶液和盐酸多巴胺溶液对红细胞膜的保护作用。红细胞悬液在不同浓度的氯化钠磷酸盐缓冲液中的溶血率为对照组，与添加盐酸多巴胺溶液和不同浓度的氯化钠磷酸盐缓冲液中的溶血率、添加卵磷脂溶液和不同浓度的氯化钠磷酸盐缓冲液 中约溶血率相比较。通过溶血的外观观象，光密度值和溶血率可得出：离体的情况下：盐酸多巴胺对红细胞有一定的保护作用。同时，也发现了卵磷脂与红细胞在低渗溶液中的相互作用的特殊观象；其机理有待进一步的研究。 关键词： 红细胞膜，渗透脆性，溶血率 前言：血液流贯全身，许多生理观象、病理变化都可能在红细胞膜的结构和功能变化中得到反映。红细胞取材容易，其膜结构、骨架结构均是目前生物材料中了解得最为详细的，因而作为模型被广泛用于理论研究和各项珍断及治疗的研 究(许红：1994)。 红细胞膜正常的结构和功能是红细胞进行生命活动的基础。红细胞膜的结实情况即红细胞的渗透脆性被用来监测人体健康的一个重要指标。如果红细胞渗透脆性增加，红细胞则容易溶血，丧失了生理功能，会影响人的身体健康。由于构成细胞膜脂质主要为磷脂双分子层，而磷脂双分子层的疏水脂酰键之间有疏水作用：这种作用对维持膜结构起主要作用(王镜岩，2002)。因此，在红细胞悬液中加入适量磷脂等物质，在低渗条件下，测量红细胞的溶血速度，渗透性，以监测加入物质对红细胞离体条件下的保护作用。 l、实验原理 红细胞渗透脆性试验：红细胞悬于等渗的盐水(含氯化钠9.0g/L)中，能保持其双面盘型形态而不改变。如氯化钠增加(高渗)红细胞水分渗出细胞外而出现皱缩：如氯化钠减少，则水分渗入细胞中，使红细胞膨胀以至破裂、溶血。利用这一原理，将红细胞加入一系列不同浓度的低渗盐水中检验溶血程度，以测定红细胞抵抗低渗溶液的能力，称为红细胞渗透脆性实验(吴学礼，2004：朱忠勇：1992；Silbestronie，1983)。根据这一实验，测定红细胞溶血速率。 2、实验材料及方法 2、1实验材料 实验动物；试验用自兔 实验仪器：722分光光度计、离心机、微量移液器、Tip头、量筒、电子天平、烧杯、胶头滴管、小试管、手术剪刀、镊子 实验药品：肝素、蒸馏水、PH试纸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、大豆卵磷脂、盐酸多巴胺 2、2实验方法 将样品悬液注入含有磷脂等物质不同浓度的氯化钠低渗液中，同时设置对照组(不含磷脂等物质)，红细胞就会快速膨胀并溶血。然后，在540nm(血红蛋白的最大吸收峰)时，测定红细胞悬液低渗液离心后上清液的光密度值，根据各管的光密度值计算红细胞在不同氯化钠溶液中的溶血率(宋立川：1997)，绘制溶血曲线，研究哪些物质对红细胞膜有保护作用。 3、实验步骤 3、1不同浓度氯化钠溶液的配置 3、1、1缓冲氯化钠储存液的配置 缓冲氯化钠储存液（相当于含NaCll00g/L的渗透压，pH=7.4) NaCl(分析纯，烤千)90.00g Na2HPO4 13.65g NaH2PO4·2H20 2.43g 蒸馏水加至 1000ml 溶解后装于有塞瓶内，置冰箱中保存，可用数月。 3、1、2不同浓度氯化钠溶液的配置 不同浓度氯化钠溶液的配置：先将上述储存液稀释10倍，制成相当于10g/LNaCl的缓冲液。取清洁的试剂瓶按上表配制不同浓度的氯化钠溶液。 3、2红细胞悬液的制备 严格按照实验动物的取血方法进行采血(施新献，1980)；抽取兔血样，加入肝素，制成肝素抗凝或脱纤维血，用等渗生理盐水洗三次，2000rpm，5分钟离心，弃上清，将所得细胞按体积用生理盐水稀释成一定浓度的细胞悬液。 试管号 10g/LNaCl溶液(mL) 蒸馏水(mL) NaCl终浓度(g/L) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 9.0 8.0 7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 9.0 8.0 7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 3、3测定红细胞悬液在低渗下的上清液的光密度值 实验分三组进行：①未加入任何物质的红细胞悬液的低渗液 ②加入盐酸多巴胺试剂的红细胞悬液的低渗液 ③加入卵磷脂溶液的红细胞悬液低掺液 3、3、l不加任何物质低渗液光密度值的测定及溶血率的计算 第一组光密度值的测定及溶血率的计算:取50μL红细胞悬液，分别加入不 同浓度的4.5mLNaCl磷酸盐缓冲液中，立即混匀。静止于室温(20℃～30℃)中 30m