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辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书 第十七节 人类免疫缺陷病毒标准操作规程 文件编号：SH-SOP-017 版本：2006-07 生效日期：2006-07-01 珠海丽珠试剂（双抗原夹心酶联免疫法）检测HIV抗体 实验原理 本品用钝化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗原宝贝的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其它试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中HIV-1/HIV-2抗体，适用于献血员筛查及临床HIV抗体检测。 试剂组成 HIV抗原包被板 12孔×8/8孔×12 HIV酶标记物 7ml×1瓶 HIV阴性对照 1ml×1瓶 HIV阳性对照 1ml×1瓶 20倍浓缩洗液 50ml×1瓶 底物缓冲液 7ml×1瓶 底物液 7ml×1瓶 终止液 7ml×1瓶 封口袋 1个 封板膜 3张 使用说明书 1份 操作步骤 加样：将所需数量的板条固定于板架，每次试验设空白对照1孔，阳性对照2孔，阴性对照3孔分别加入阳阴性对照各50ul，其余孔加入50ul待测样品。 温育：置37℃温育30分钟。 洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。 加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50ul。 温育：置37℃温育30分钟。 弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。 显色：每孔加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，震荡混匀，置37℃温育30分钟。 终止：每孔加入终止液50ul，轻拍混匀。 读值：用酶标仪读值，在单波长450nm或双波长450nm/630nm下读取各孔A值。 辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书 第十七节 人类免疫缺陷病毒标准操作规程 文件编号：SH-SOP-062 版本：2006-07 生效日期：2006-07-01 判定结果： 要求： 阳性对照A值应≥0.8 阴性对照A值应≤0.12 2. 临界值（C.O.）计算： 临界值（C.O.）=0.15+阴性对照平均A值 注：阴性对照平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按实际值计算。 3． 结果判断：　　样品Ａ值≥临界值（C.O.）为ＨＩＶ抗体阳性 　　　　　　　　　样品Ａ值临界值（C.O.）为ＨＩＶ抗体阴性　　 初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，如果复试中任何一孔为阳性则样品视为HIV抗体阳性，对复试结果为阴性的标本请按《全国艾滋病检测技术规范》处理。 注意事项： 样品的收集及保存 待测的血清或血浆样品不可用NaN3防腐。 短期内进行检测的血清或血浆样品可存放于2-8℃，如需长期保存，应置于-20℃。避免反复冻融。 试验准备 本试剂的使用单位必须是经各级卫生行政部门批准的HIV检测实验室。 整个HIV检测必须符合《全国艾滋病检测技术规范》，严格防止交叉感染。操作时必须戴手套，穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。 从冷藏环境中取出的试剂盒应平衡至室温后方可打开使用。 未使用完的预包被板条应置于有干燥剂的封口袋中密封保存。 若20倍浓缩洗液出现结晶，请置于37℃至溶解后在使用。 不同批号的试剂组分不可混用。 本试剂盒及各种废弃物阴按传染性物品处理。 实验操作 试剂使用前应充分摇匀。 洗涤时各孔均须加满洗液，以防止孔口有游离酶标记物未被洗净。 结果判读请在反应终止后15分钟内完成。 测定结果必须以酶标仪读数为准。 编写： 审核： 批 准： 批准日期：2006年07月01日 辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书 第十七节 人类免疫缺陷病毒标准操作规程 文件编号：SH-SOP-062 版本：2006-07 生效日期：2006-07-01 北京万泰生物试剂 目的： 本试剂盒定性检测人血清和血浆中的HIV-1/HIV-2抗体，适用于献血员筛查，临床检测及血液制品检测。 原理： 本试剂和应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）检测血清或血浆样品中人类免疫缺陷病HIV(1+2型) 抗体。与包被高纯度基因重组HIV(1+2型) 抗原，可与样品中抗HIV抗体反应，加入HRP标记HIV(1+2型) 抗原，然后用TMB地物作显色。通过酶表仪检测吸光度，从而判定样品中HIV抗体的存在与否。 试剂盒组成： HIV酶标板 12孔×8/8孔×12 HIV