环境微生物实验.doc

实验报告 课程名称：_______________________________指导老师：________________成绩：__________________ 实验名称：_______________________________实验类型：________________同组学生姓名：__________ 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。 2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的实用技术和维护知识。 3、在油镜下观察细菌的几种基本形式。 4、采用悬滴法在高倍镜下观察细菌运动。 基本内容和基本原理 （一）普通光学显微镜的构造 普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成。 机械系统 机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可视显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持臂筒，也是移动显微镜时手握的部位。 （3）臂筒：它是连接目镜和接物镜的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。 （4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3—5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜，转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而导致损坏。 （5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；装有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后或左右移动。有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。 （6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物镜更清晰。粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。 2、光学系统 光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。 目镜：它的功能是把物镜放大的物象再次放大。目镜一般由两块透镜组成。上面一块称接目透镜，下面一块称为场镜。在两块透镜之间或在场镜下方有一光阑。由于光阑的大小决定着视野的大小，故又称它为视野光阑。标本成像于光阑限定的范围之内，在光阑上粘一小段细发可用作指南针，指示视野中标本的位置。再进行显微测量时，目镜测微尺被安装在视野光阑上。目镜上可有5×、10×、15×、20×等放大倍数。可按需使用。 物镜：它的功能是把标本放大，产生物像。物镜可分为低倍数（4×或10×）、中倍镜（20×）、高倍镜（40×~60×）和油镜（100×）。一般有油镜上刻有“OI”或“HI”字样，有的刻有一圈红线或黑线，以示区别。物镜上通常标有放大倍数、数值孔径、工作距离、及盖玻片厚度等参数。以油镜为例，100/1.25表示放大倍数为100倍，NA为1.25；160/0.17表示镜筒长度160mm，盖玻片厚度等于或小于0.17mm。 （3）聚光器：聚光器又称聚光镜，它的功能就是把平行的光线聚焦于标本上，增强照明度。聚光器安装在镜台下，可上下移动。使用低倍物镜时应降低聚光器，使用油镜时则应升高聚光器。聚光器上附有虹彩光阑，通过调整光阑孔径的大小，可以调节进入物镜光线的强弱。在观察透明标本时，光圈宜调得相对小一些，这样虽会降低分辨力，但增强反差，便于看清标本。 （4）反光镜：它是普通光学显微镜的取光设备，其功能是采集光线，并将光线射向聚光器。反光镜安装在聚光器下方的镜座下，可以在水平与垂直两个方向上任意旋转。反光镜的一面是凹面镜，另一面是平面镜。一般情况下选用平面镜、光量不足时可换用凹面镜。 （二）普通光学显微镜的性能 1、数值孔径 数值孔径（NA）又称开口率，是指介质折射率与镜口角1/2正弦的乘积。可用式1-1表示。 其中n为物镜与标本之间介质的折射率，α为镜口角。 物镜的性能与物镜的数值孔径密切相关，数值孔径越大，物镜的性能越好。因为镜口角α总是小于180°，所以sin(α/2)的最大值不可能超过1.又因为空气的折射率为1，所以以空气的介质的数值孔径不可能大于1，一般为0.05-0.95。根据式1-1，要提高数值孔径，一个有效途径就是提高物镜与标本之间介质的折射率。使用香柏油浸没物镜理论上可将数值孔径提高至1.5左右；实际数值孔径也可达到1.2-1.4。