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DNA复制、修复 原核生物复制相关酶和蛋白及其功能 一、DNA聚合酶 种类： ①DNA聚合酶I： 由一条单一肽链组成，是一个多功能酶，包括： DNA聚合酶活性 3′-5′外切核酸酶活性，被认为起着校对的功能，能切除聚合过程中的错配碱基 5′-3′外切核酸酶活性 ②DNA聚合酶II：没有5′-3′核酸外切酶活性， 次要的DNA修复酶 ③DNA聚合酶III：是真正的DNA复制酶（多亚基、多层次组装） ④DNA聚合酶IV ⑤DNA聚合酶V（以上两种酶参与SOS修复） 二、解螺旋酶 解螺旋酶利用水解NTP产生的能量在复制叉处打断氢键，使亲代DNA双链分离。 三、旋转酶 通过水解ATP引入负超螺旋，消除复制叉前进带来的扭曲张力 四、SSB蛋白（单链结合蛋白） SSB蛋白与单链结合： 防止单链复性 维持单链刚性状态 避免单链降解 SSB蛋白的结合具有协同效应 引发酶 引发酶是一种RNA聚合酶，能够合成RNA短片段作为DNA合成的引物。 DNA连接酶 1、酶活化 2、AMP转移 3、3′-OH亲核攻击 碱基替代 ①转换：两种嘧啶之间或两种嘌呤之间互换，这种置换方式最为常见。 ②颠换：在嘌呤与嘧啶之间发生互换，较为少见。 增变基因 增变基因的突变引起整个基因组突变率的明显上升。如编码DNA聚合酶的各个基因，和修复相关酶的基因。 SOS反应 ①是细胞DNA受损或复制系统被抑制时产生的应急反应， ②SOS反应包括： 溶原性细菌释放噬菌体； DNA损伤的修复效应和诱变效应； 细胞分裂的抑制。 ③诱导的修复系统： 避免差错的修复系统 倾向差错的修复系统 ④SOS诱导产生DNA聚合酶Ⅳ和V： Pol IV和Pol V没有3’核酸外切酶校正功能，使DNA链在损伤部位出现不配对碱基时，复制仍能继续前进。在此情况下允许错配可增加存活的机会。⑤SOS反应由Rec A蛋白和Lex A蛋白相互作用引起。 Rec A被称为辅蛋白酶，在有单链DNA和ATP存在时，Rec A蛋白被激活而促进LexA自身的蛋白水解酶活性。 LexA蛋白是许多基因的阻遏物，当它被RecA激活自身的蛋白水解酶活性后自我分解，使一系列SOS基因得以表达，如:umuDC(编码DNA聚合酶V) ，dinB(编码DNA聚合酶Ⅳ) RNA转录 原核生物启动子的种类 ①-10序列： T80 A95 T45 A60 A50 T96 又称为牢固结合位点，在这一区域DNA双链熔解，形成开放复合物 ②-35序列： T82 T84 G78 A65 C54 A45 为RNA聚合酶识别位点，又称为初始结合位点 ③CAP位点： 位点I -70~-50 位点II -50~-40 原核生物的转录过程 ①起始： 全酶结合DNA，封闭的二元复合物，DNA溶解，开放的二元复合物，流产起始，三元复合物，σ因子释放或改变构象，RNA合成起始。 ②延伸： （1）核苷酸的进入： Bridge 蛋白（直构型 ）与核苷酸进入位点相邻 新的核苷酸结合到核苷酸进入位点 Bridge蛋白转变为弯曲构型，移动一个碱基的距离 Bridge恢复为直构型，等待下一个核苷酸的进入 （2）延伸中的拓扑异构： 转录过程中，在RNA聚合酶前方和后方分别产生正超螺旋和负超螺旋，因此，在转录延伸过程中需要旋转酶(引入负超螺旋)和拓扑异构酶I(消除负超螺旋) 尺蠖模型 ③终止： （1）不依赖ρ因子的终止子 结构特征： 发夹结构；末端有一系列U核苷酸(约6个)；茎基部通常包含一个富含G-C的区域。 作用机制： 发夹形成，RNA聚合酶暂停，DNA模板和转录产物之间仅以A-U键连接。 键断裂，释放RNA链，转录终止。 （2）依赖ρ因子的终止子： 结构特征： 同样包含发夹结构；无其他固定特征。 ρ因子的结构： ρ因子具有N端的RNA结合域和C端的ATPase酶活性，ρ因子六聚体形成一个有缺口的环状结构。 从RNA的3’端，沿着六聚体N端结合域的外侧，缠绕RNA，同时将所结合RNA区域的5’端引入内部，与C端的另一个RNA结合域结合。 RNA 5‘端的持续引入，最终表现为ρ因子六聚体沿RNA5’－3‘方向移动 ρ因子终止转录： RNA合成起始以后，ρ因子附着在新生的RNA链上，依靠水解ATP产生的能量，沿着5’→3’方向朝RNA聚合酶移动 终止子形成发夹结构，ρ因子追上暂停的RNA聚合酶 ρ因子解开DNA/RNA杂合链，使RNA链从DNA模板上释放，转录过程终止 核内小RNA的种类 SnRNA(核内小RNA）与特异性蛋白结合，形成核内小核糖核蛋白颗粒(SnRNPs)。 mRNA 前体和SnRNPs动态聚合，形成剪接体。 SnRNPs：U1、U2、U4、U5、U6 SnRNA与mRNA、或snRNAs之间具有互补序列，这种碱基互