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题 目: 重组乙醛脱氢酶的分离纯化及其酶学性质研究 姓 名: 学 院: 专 业: 班 级: 学 号: 指导教师: 职称: 目 录 摘要 1 关键词 1 Abstract 1 Key words 1 引言 1 1材料与方法 2 1.1 材料 2 1.1.1菌株 2 1.1.2培养基 2 1.1.3主要试剂 2 1.1.4 主要仪器 2 1．2 方法 2 1.2.1 乙醛脱氢酶的表达和制备 2 1.2.2 乙醛脱氢酶的纯化 3 1.2.3 乙醛脱氢酶活力测定 3 1.2.4 蛋白含量测定 3 1.2.5 纯度鉴定和分子量测定 3 1.2.6 乙醛脱氢酶酶学性质 3 1.2.6.1 酶的最适反应pH及pH稳定性 3 1.2.6.2酶的最适反应温度及热稳定性 3 1.2.6.3 金属离子和其他化合物对酶活力的影响 3 1.2.6.4不同底物对酶活性的影响 3 1.2.6.5动力学常数Km和最大反应速度Vmax的测定 3 2 结果与分析 3 2.1乙醛脱氢酶的分离纯化 3 2.2乙醛脱氢酶酶学性质研究 4 2.2.1酶的最适反应pH及酸碱稳定性 4 2.2.2 酶的最适反应温度及热稳定性 5 2.2.3金属离子和其他化合物对酶活性的影响 6 2.2.4不同底物对酶活性的影响 7 2.2.5酶的动力学常数 7 3讨论 8 致谢 9 参考文献： 9 重组乙醛脱氢酶的分离纯化及其酶学性质研究 摘要：【目的】研究工程菌E.Coli BL21(DE3)/pET32a-istALDH产乙醛脱氢酶的纯化和酶学性质。【方法】工程菌经过 IPTG 诱导后产生乙醛脱氢酶，通过Ni-NTA 亲和层析纯化，得到纯度较高的酶蛋白，并对纯酶进行了酶学性质及动力学研究。【结果】酶最终被纯化了9倍，并达到电泳纯。经过SDS测得该酶的分子量约为57 kDa。以乙醛为底物，酶促反应的最适温度为40℃，最适pH值为9.0，热稳定性和酸碱稳定性相对较差；金属离子K+、Li+、AL3+对酶均具有激活作用，而Ag+、Zn2+、Gu2+对酶促反应具有强烈的抑制作用，酶活性基本丧失，在化合物EDTA、DTT中活性明显提高，SDS使酶完全丧失活性；反应的最适底物是乙醛和NAD+,乙醛和NAD+动力学常数Km值分别为1.034mmol/L和0.274mmol/L，最大反应速度Vmax分别为29.07U/mg和22.62U/mg。【结论】研究为重组乙醛脱氢酶纯酶的纯化、得到稳定性好、活性高的酶反应体系及利用该酶进行催化反应和工业化应用提供了重要参数。 Study on Purification and Characterization of Recombinant ALDH Student majoring in National Life Science and Technique Talent Training Base? Jie Xu Tutor Zhaoxin Lu Abstract：[Objective] To purify and characterize recombinant aldehyde dehydrogenase expressed in engineered strain E. Coli BL21(DE3)/pET32a-istALDH. [Methods] The aldehyde dehydrogenase gene was expressed in engineered strain after IPTG induction and the crude enzyme was obtained by sonication. We purified the recombinant aldehyde dehydrogenase by using metal chelate affinity chromatography on a Ni-NTA column. Then we characterized catalytic kinetic parameter of purified enzyme. [Results] The molecular weight of aldehyde dehydrogenase measured by SDSwas 57.2 kDa. The e