尿素柱层析法分离共轭亚油酸异构体的研究.docVIP

尿素柱层析法分离共轭亚油酸异构体的研究 摘要 研究了负载型尿素层析柱分离共轭亚油酸甲酯异构体过程中的影响因素，考察了甲醇残留量，尿素与硅胶的比例，不同温度下结晶的固定相，不同流动相对分离效果的影响，得到最佳条件下分离效果为10反12顺共轭亚油酸含量从原料的40%提高到59%。 关键词 尿素柱层析 共轭亚油酸甲酯 异构体 Klare S Markley等发现不饱和脂肪酸分子截面包藏困难双键越多越。共轭亚油酸是亚油酸共轭化的产物，亚油酸两个顺式双键中的一个在共轭化过程中会发生位移，同时顺式双键转化为反式双键。共轭亚油酸主要是（顺9，反l1）二烯酸和（l0反，12顺）二烯酸的混合物。这两种异构体所具有的生理功能有很大差异，为了更好的发挥其各自的优异功能，有必要将两种异构体进行分离。 目前大都是将亚油酸从其他脂肪酸中纯化的方法，没有针对共轭亚油酸异构体分离的直接方法，已经做的比较好的方法有尿素包合法，该法虽然成本较低，但存在收率低，污染严重等问题； 无溶剂尿素包合+超临界CO2萃取技术+冷冻分离方法分离两种异构体，工艺复杂，成本高，产业化困难 也有利用假丝酵母脂肪酶两步选择性酯化和分子蒸馏相结合，该方法虽然分离效果很好，但是成本高，收率低，难于产业化。1 实验材料与方法 1.1主要材料与试剂 无水甲醇、石油醚、尿素、无水硫酸镁、浓硫酸均为分析纯；柱层析硅胶、共轭亚油酸（油酸13.1%、 c9，tl1～CLA32%、c12，tl0～CLA40.3%、其他CLA14.6%）1.3.3固定相中溶剂残留量的检测 精确移取2mL蒸馏水于八个试管中（容量瓶），分别加入3μL、5μL、10μL、25μL、50μL、75μL、100μL、125μL无水甲醇，在柱温100℃，汽化室和检测室150℃的色谱条件下（检测器），进样量3μL、，得到甲醇体积与峰面积的线性关系曲线：y=0.9532x，线性度R2=0.9972。 准确称取0.5g固定相，加入2Ml蒸馏水，充分摇动，过滤，滤液景象气相色谱分析，进样量3μL。以经过换算得到的线性曲线w%=0.1906A作为溶剂残留量大小的比较依据。 其中：w为固定相中甲醇的质量分数，A为色谱图中甲醇峰面积。 1.3.4装柱 称取60g柱层析固定相放入石油醚中浸泡、搅动除去其中的气泡；带气泡驱除完全，湿法装入层析玻璃管柱中，制备成负载型尿素层析柱。 1.3.5尿素柱层析分离共轭亚油酸甲酯 取一定量的共轭亚油酸甲酯，加入到层析柱上层，以石油醚为洗脱剂洗脱，每10mL收集一个洗脱份，对洗脱份进行色谱分析，确定共轭亚油酸各异构体含量。 1.3.6共轭亚油酸异构体的检测 初温200℃，汽化室和检测室温度为230℃，TL9900色谱工作站，氢火焰检测器，峰面积归一化法计算共轭亚油酸甲酯的相对含量。 检测方法？？？？？？ 2结果与讨论 2.1共轭亚油酸甲酯原料的组成 甲酯化后的共轭亚油酸样品进行气相色谱分析，得到共轭亚油酸样品组成如图1， A1为油酸15.46%，A2为c9，t11共轭亚油酸31.37%，A3为t10，c12共轭亚油酸41.3%，A4与A5均为全反式共轭亚油酸异构体，含量分别为5.52%和6.35%。 2.2残留量影响 34号 22号 16号 23号 18号 15号 图2 甲醇残留量不同对洗脱过程的影响 （图中依次是由甲残量最少到最多的变化，其中16号为最好分离效果） 由图中可以看到，甲醇的影响很大，随着洗脱的进行，甲醇残留量逐渐降低，初期被包合的共轭亚油酸其他异构体，油酸，以及c9，t11CLA都会被洗脱下来。而且洗脱进行到约20号洗脱份时，c9，t11CLA和t10，c12CLA两异构体含量曲线渐渐接近，洗脱到最后，二者可能会交叉。 固定相中残留的甲醇可能的作用一是提供尿素与脂肪酸发生包合的微环境，使分子间有更多的碰撞，实现四棱柱向其他构型的转变，另一方面是维持所形成包合物新构型的稳定性。（丁明玉 现代纯化与分离技术） 洗脱初期由于体系中甲醇残留量较高，有包合的微环境，使得三者有机会与尿素接触，进入尿素孔道，形成包合物。随着洗脱的进行，甲醇残留量逐渐降低，过少的甲醇残留量不能维持包合物的稳定性，不断加入的流动相会冲击破坏包合物，因而三者被洗脱。 固相中残留甲醇也有可能是起到一种助晶剂的作用，即当尿素晶体中存在少量甲醇时，使得尿素四方晶体呈现缺损状态，这种不完整的晶体具有较高的表面能，极易与链状的饱和脂