实验五神农架土壤微生物的分离纯化.doc.docVIP

实验 神农架土壤微生物分离纯化 一、目的要求 1 掌握微生物的三种分离方法：稀释平板法；平板涂抹法；平板划线法2 观察细菌、放线菌和真菌的菌落形态、颜色、大小 3 比较和识别四大类微生物的菌落形态 二、实验材料 样品：神农架土壤 培养基：肉膏蛋白胨培养基（培养细菌） 高氏一号培养基（加酚液培养放线菌） 查氏培养基（加链霉素液培养霉菌） 试剂和仪器：无菌水、无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、水浴锅 2人一小组：6个培养皿，3支装有9 ml的无菌水的试管，5根1ml无菌吸管，1根无菌三角玻璃涂棒 三、实验原理 土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物所需要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件．所以土壤中微生物的数量和种类都很多。它们参与土壤的氮、碳、硫、磷等元素的循环作用。此外，土壤中微生物的活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常重要的作用。因此，从土壤中微生物的数量和组成情况，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是十分必要的。 四、实验过程 1、微生物的分离 2、细菌、放线菌和真菌的菌落特征观察 3、四大类微生物菌落形态的比较和识别 1、微生物的分离方法 土壤稀释液制备 称取土壤10 g，用研钵研碎放入90 mL无菌水的三角瓶中（加入玻璃珠），振荡10 min，即为稀释10－1的土壤悬液。 另取装有 9 mL无菌水试管 5支，用记号笔编上10－2、10－3、10－4。取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止0.5 min，用无菌吸管吸取1 mL土壤悬液加入10－2的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－3、10－4 土壤稀释液。（）用稀释平板法从土壤中分离真菌。（使用查氏培养基） （）用平板涂抹法分离土壤中的放线菌。（使用高氏一号培养基） （）用平板划线法分离土壤中的细菌。（使用牛肉膏蛋白胨培养基） （）稀释平板法（使用查氏培养基） A 每组取培养皿2只，即每个同学做1只。先在无菌培养皿底部贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 B 另取一吸管，以无菌操作法吸取10－3或10－4土壤稀释液0.2mL，加在无菌培养皿的一边，在皿的另一边加入2滴10％酚。此时两液严防相混。 C 取已熔化的在水浴锅中保温45－50 左右的查氏培养基，分别倒入上述培养皿中（见图－2），轻轻转动培养皿，使菌液、 10％酚、培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于28 恒温培养。 （）平板涂抹法（使用高氏一号培养基） A 每组取无菌培养皿2只（每个同学做1只）。在皿底贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 B 以无菌操作法先在培养皿中加入重铬酸钾溶液溶液2滴，取已熔化的高氏一号培养基，分别倒入培养皿，使培养基与重铬酸钾溶液充分混匀，铺平，制成平板。 C 凝固后，另取一支吸管吸取10－3或10－4的土壤稀释液0.2 mL放在平板上。 D 用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒置于28条件下培养。 （）平板划线法（使用牛肉膏蛋白胨培养基） A 每组取无菌培养皿2只，在皿底贴上标签，注明事项。取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。 B 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10－3或10－4）在平板上划线。 连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。 C 划线完毕，盖上皿盖，倒置于37温室培养。 2、实验结果的观察与记录 （1）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌)24 h和48 h各观察一次，记录菌落形态、颜色、大小； （2)查氏培养基（培养真菌）48 h观察真菌菌落形态以及计数菌落。并计算出每g土壤中真菌的数量。即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得； （3）高氏一号培养基（培养放线菌）100～120h观察菌落形态及计数菌落，并计算出每g土壤中放线菌的数量（方法同上）。 3、四大类微生物菌落形态的比较和识别 区分和识别各大类微生物通常包括菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）两方面的观察。 菌落形态： 菌落表面湿润：细菌——薄而小，酵母菌——厚而大。 菌落表面干燥：放线菌——密而小，霉菌——松而大。 细胞形态：细菌——小而分散 ;酵母菌——大而分散;放线菌——丝状细; 霉菌——丝状粗 五、实验任务 1、2个培养皿倒查氏培养基（稀释平板法分离真菌） 2、2个培养皿倒高氏培养基(三角玻棒涂布法分离放线菌） 3、2个培养皿倒牛肉膏蛋白胨培养基（划线法分离细菌） 课后任务：实验结果的观察与记录 六、思考题 1、什么叫无菌操作？平板培养时为什么要把培养皿倒置？.倒置好拿，不会出现拿平板时盖子和底分