实验十二去壁低渗法制备植物染色体标本.pptVIP

实验十二 去壁低渗法制备植物染色体标本 一、实验目的 1.了解植物细胞周期中染色体的动态变化。 2.学习去壁低渗火焰干燥法进行植物染色体制片的基本原理和方法。 二、实验原理 植物染色体的常规压片技术在植物细胞遗传学研究中发挥了重要作用,特别 是许多植物的染色体计数和组型分析都是用这种方法完成的,但这种方法也存在一定缺陷,如染色体很难完全散开,容易产生重叠、变形、断裂，影响显带结果等，给核型分析增加了不少困难。另外，在当前植物染色体Giemsa分带研究中，由于压片法很难完全除掉细胞质及细胞壁对染色体的覆盖，因而常常造成Giemsa带可重复性较低，使植物染色体Giemsa分带研究受到一定的影响。其次，由于植物染色体处理方法尚不理想，影响到亚显微结构的研究。因此改革植物染色体压片法是促进植物染色体的研究，特别是植物染色体Giemsa分带和亚显微结构研究的重要关键。20世纪70年代以来，一些从事植物染色体研究的学者，参照动物及人类染色体标本制备技术，开展了对植物细胞去壁、低渗、火焰干燥方法的研究，取得了很好的结果，目前这种方法已广泛用于染色体计数、组型分析、显带、显微操作、原位杂交等分子细胞遗传学研究领域。 三、实验材料 水稻（Oryza sativa）、玉米(Zea mays)、蚕豆（Vicia faba）、豌豆(Pisum sativum)种子或洋葱(allium cepa)鳞茎。 四、实验器具与药品 ⒈器具：恒温培养箱，显微镜，载玻片，酒精灯。 ⒉药品试剂：对二氯苯饱和溶液，甲醇，冰醋酸，70%酒精，纤维素酶，果胶酶，Giemsa原液，1/15mol/L(pH6.8～7.2)，0.075mol/L KCl。 五、实验步骤 结果观察 先在低倍物镜下进行观察，找到较好的中期分裂相后，直接加显微镜油并转换为油镜头进行观察（若使用香柏油，则需加盖玻片，因为在香柏油中染色体会褪色）。选择较好的分裂相用显微镜上配备数码照相装置摄影，并将打印照片附于实验报告中。 蚕豆根尖2n=2x=12 豌豆根尖 2n=2x=14  玉米根尖 2n=2x=20  水稻根尖 2n=2x=24  五、作业 比较动植物低渗法制作染色体玻片的异同。 * *