差示分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量.docVIP

实验一 差示分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量 目的要求 掌握差示分光光度法消除复方制剂干扰组分的原理。 熟悉差示分光光度法的基本测定方法。 基本原理 差示分光光度法（简称ΔA法）是利用在两种不同pH介质中或经适当的化学反应后，供试品中待测组分发生了特征性的光谱变化，而干扰组分不受这些变化的影响，光谱行为不发生改变。取两份相等的供试溶液，用两种不同pH的介质处理或经适当化学反应后，稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一分置参比池中，由于样品池和参比池中干扰物浓度相等，因此干扰物吸收度的差值为零（即ΔA＝0），供试溶液的吸收度差值（ΔA值）只与被测物浓度成正比，从而消除了干扰。可以用标准曲线法或标准对比法计算出待测组分的含量。分光光度法既保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无须事先分离，并能消除干扰。 复方头孢氨苄胶囊由头孢氨苄与甲氧苄啶组成，在酸性溶液和碱性溶液中，甲氧苄啶的紫外吸收光谱发生改变，而头孢氨苄的吸收光谱基本不变，因此不经分离可用差示分光光度法直接测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量。 仪器与试剂 紫外－可见分光光度计，50mL量瓶，100mL量瓶；甲氧苄啶对照品，头孢氨苄对照品，复方头孢氨苄胶囊，醋酸，0.01mol/L氢氧化钠液。 操作步骤 对照品溶液的配制 分别取甲氧苄啶对照品约25mg，头孢氨苄对照品约125mg，精密称定，分别置于50mL量瓶中，加稀醋酸2mL溶解后加水稀释至刻度，摇匀，各精密吸取5mL，2份，分别置于100mL量瓶中，一份用水稀释至刻度，另一份用0.01mol／L氢氧化钠稀释至刻度。 差示吸收曲线的绘制 将两种不同介质的头孢氨苄溶液和甲氧苄啶溶液分别以相应 为空白，在200～350nm波长范围扫描，绘制吸收光谱。 将上述用水稀释的对照品溶液置于参比池中，用0.01mol/L氢氧化钠稀释的溶液置样品池中，绘制甲氧苄啶和头孢氨苄的差示光谱。甲氧苄啶差示吸收曲线（见图15－1）显示在约293±1nm波长处有最大ΔA值，在此波长处头孢氨苄的ΔA值几乎等于零，因此293±1nm处的ΔA值与甲氧苄啶浓度成正比。故选用293±1nm作为甲氧苄啶的测定波长，可以不经分离直接测定甲氧苄啶的含量。 含量测定 取复方头孢氨苄胶囊20粒，精密称定，倾出内容物混匀。胶囊壳用小刷子拭净，精密称定囊壳重量，计算胶囊的平均装量。精密称取内容物适量（约相当于甲氧苄啶25mg），置于50mL量瓶中，加稀醋酸2mL溶解后加水稀释至刻度，摇匀，过滤，精密吸取续滤液5mL，2份，自“分别置于100mL量瓶中……”起，照“对照品溶液的配制”项下方法操作。于293±1nm波长处分别测定对照品溶液和样品液的ΔA值。计算相当于标示量的百分含量。 式中：ΔAu为供试液的ΔA值；ΔAs为对照液的ΔA值；Cs为对照液浓度（mg/mL）；D为稀释倍数；W为取样量。 甲氧苄啶 头孢氨苄 操作注意事项 由于仪器波长可能有差异，因此在选择测定波长时应根据绘制的差示光谱选取头孢氨苄ΔA值几乎等于零的波长为测定波长，否则将影响甲氧苄啶含量测定的准确性。 思考题 为什么采用差示分光光度法能消除头孢氨苄对甲氧苄啶测定的干扰？ 差示分光光度法有哪些优点？ ［参考文献］ 刘文英等，药物分析，人民卫生出版社1998年版。 孟令姝 张凤霞，药物分析杂志，1992：12（4）231。 实验十八 HPLC法测定五味子中五味子醇甲的含量 ［实验原理］ 本实验以五味子醇甲作为对照品，采用高效液相色谱法测定了药材中五味子醇甲的含量，药典规定五味子中醇甲的含量不得少于0.4％。 ［含量测定］ 条件 仪器：高效液相色谱仪、泵、数据处理机、紫外检测器、微量进样器、超声仪 试药：五味子醇甲对照品、五味子粉末（过三号筛） 试剂：甲醇－水（13:7）、甲醇 实验条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水（13:7）为流动相；检测波长为250nm，理论板数按五味子醇甲计算应不低于2000。 实验方法 对照品溶液的制备：取五味子醇甲对照品15mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每ml含五味子醇甲0.3mg）。 供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.25g，精密称定，置20ml量瓶中，加甲醇约18ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，即得。 ［实验记录］ 记录实验结果，绘制标准曲线图。 计算五味子中醇甲的含量。 ［思考题］ 木酯素类成分的结构特点是什么？ ［相关资料］ 五味子的化学成分 五味子为木兰科植物五味子