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流式微球技术 第10组 ——张蓉蓉 简介 定义： 流式微球分析技术 (cytometric bead array,CBA) 是将聚苯乙烯微球、荧光染料标记系统、激光技术、应用流体学、数据分析软件及微球专用流式细胞仪有机地整合在一起而产生的一项新技术。 流式微球分析技术的起源与发展 传统的流式细胞术 传统的流式细胞术 ( flow cytometry, FCM ) 是利用流式细胞仪对细胞或亚细胞结构进行快速测量的分析和分选技术。 所能获得的参数主要限于细胞、细菌或微粒的大小、形状及其比率难以作生物医学上有重要意义的复杂样品中多组分的同时检测 , 更难以对基因和蛋白质做全基因组分析。 荧光微球 目前各种材料人工合成多种颜色和规格的荧光微球有两大类： 流式微球分析技术的发展 新近发展起来的以编码微球为基础的流式细胞仪检测技术迅速发展, 与传统的流式细胞术相比 ,其实验或检测中的数据收集和分析是通过聚苯乙烯荧光微球上所携带的信号来完成的 , 而不再是细胞。 小分子化合物流式微球分析技术原理 原理：以流式微球为载体,基于竞争法免疫分析原理,通过流式细胞仪定性和定量检测小分子化合物。 应 用 流式微球技术在液相环境中进行,可保持蛋白质构象不变,有利于抗原抗体结合,且具有高通量、快速分析多重生物反应的特点及高度的灵敏度和特异性,已广泛应用于医学领域。 应 用 流式微球一步法快速免疫检测马铃薯 A 病毒 【方法】以荧光微球为反应载体,通过在微球表面进行双抗夹心免疫反应形成微球-捕获抗体-PVA-标记FITC检测抗体的复合物, 利用流式细胞仪荧光检测系统收集荧光信号。 【结果】通过实验优化检测条件,最佳捕获抗体工作浓度为 4μg/mL、最佳检测抗体工作浓度为1:25倍稀释、最佳反应时间为 2h; 与马铃薯Y病毒、莴苣花叶病毒、番茄环斑病毒等均未出现交叉反应; 阳性样品经64倍稀释后依然可检出,检测灵敏度是传统微孔板ELISA的4倍。 结 语 虽然目前该技术尚存在着一些不足,如抗体对的匹配、交联条件的最优化、种混合交叉反应的避免及反应条件的优化、数据的处理等。 由于流式微球分析技术具有简单快速、敏感度好、特异性高、节省样本量、缩短分析时间、节约动力、检测费用低,以及多通路、高通量和实时数据分析等优点,因而在医学和食品安全等领域研中有极大的潜在应用价值。 * * 简介 1 流式微球分析技术原理 2 起源与发展 3 应用 4 流式细胞术. 流式微球 分析技术 荧光微球 表面不带修饰基团的微球 携带各种化学修饰基的微球团 （包括羧基修饰、氨基修饰、巯基或醛巯基修饰等） 流式微球分析技术在各种应用中的检测结果与传统的ELISA基本一致,但有着ELISA无法比拟的优越性: ⑤液相反应 ⑥节约人力资源:操作简便、快捷、耗时短; ⑦重复性好 ①通量大 ②标本利用率高 ③特异性强 ④敏感度高 , 动力学范围宽 *