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应对抗生素耐药的策略研究（二） 作者：佚名????科研信息来源：本站原创????点击数： 175????更新时间：2003-12-5 [关键词]：抗生素耐药,基因组学,分子遗传学,靶位,组合化学,组合生物学 健康网讯： 2 基于结构多样性的研究技术 一个成功的抗生素必须满足很多方面的要求。它要能够穿过细菌细胞膜，避开 细菌的外排泵，不会成为细菌修饰或水解酶的靶位而失去活性，并且能以足够的浓 度到达细菌的靶位，因而抑制细菌的重要功能使细菌失活。同时出于经济和诊断方 面的考虑，它要有广谱抗菌活性，没有毒性或很小，并在人体中不良反应最小。这 一系列的限制意味着在筛选过程中那些最初令人感兴趣的抗微生物活性的新化合物 要最终成为合格的药物，需要经过许多化学修饰。在这一过程中药物化学特别是组 合化学在构建和扩充化学库以及优化先导化合物方面起着越来越重要的作用，组合 生物学则在产生结构复杂的大分子抗生素方面有着组合化学无法比拟的优势。生物 化学能为人们在迅速筛选靶位抑制利时提供合适而敏感的体外分析方法。 组合化学使得人们在短时间内迅速合成出大量不同的化合物以测试其抗菌活性 成为了可能。据统计，至2001年总计公布了305个小分子化合物库，但因其主要是 基于少数的药效基团构建的，因此涉及的化学结构还不够多样。在活性的评价方面 ，随着适用于微量化合物筛选的高通量技术的应用，对药物作用靶位具有弱亲和力 的新类别抗生素成为优选，在此基础上，组合合成出大量先导化合物的类似物可以 使人们找到性质更佳的化合物。 “基于结构多样性的导向合成”是目前正在兴起的另一合成策略，其目的是合 成大量结构多样且复杂的小分子化合物。通过筛选这些化合物的生物学活性，最终 鉴定出活性受小分子调控的具有治疗学意义的蛋白质靶位。这方面的成功例子是用 荧光标记的酵母蛋白Ure2筛选由“基于结构多样性的导向合成”的含3780个小分子 的高密度微阵列，以前从未发现能与该酵母蛋白结合的小分子，最后经筛选分析后 得到了八个可调节蛋白功能的小分子化合物。 另一能提高化合物库多样性的手段来自于组合生物学。组合生物学的基本原理 是用抗生素生物合成途径的酶创造新的化学结构。临床上使用的化学结构最复杂的 抗生素都是基于微生物产生的次级代谢产物，这其中包括糖肽，14元和16元大环内 酯等。通过化学方法合成这样复杂的大分子是不合算的。组合生物学的目标就是控 制、引导复杂的生物合成途径进而扩展次级代谢物（如抗生素）的组份。目前组合 生物学主要针对的对象是Ⅰ型聚酮化合物（PKSs）和非核糖体肽（NRPs）的生物酶 系。 PKSs和NRPs掺入到重复的单位或“组件”中，每一个这样的“组件”都负责催 化一个完整的聚酮或多肽链延长循环以及相关的链修饰。运用，分子遗传技术有可 能改变这些组件的数目，内容和顺序进而最终改变所获得的分子结构，创造出“非 天然”的天然产物。然而到目前为止，这一尚处在早期发展阶段技术的运用除了产 生已知抗生素如红霉素和万古霉素的新衍生物外，并未获得预期的新抗生素类别。 希望随着时间的推移和研究的深入，该项技术能发挥出它在产生结构多样的新化合 物方面的巨大潜力。 3 针对耐药机理开发抑制剂 相对于筛选具有直接杀灭致病菌活性的抗生素，抑制或逆转耐药性是另一条对 付细菌耐药的途径，对致病菌耐药分子机制的研究提供了理论基础。通过研究，人 们发现敏感菌株能通过以下四种分子机制变成耐药菌株：1）突变引起外膜孔蛋白 的表达下调，缺失或结构修饰，降低了抗生素的通透性；2）突变引起跨膜外排泵 的过度表达，使得抗生素在细菌细胞内的浓度下降。通常外排泵能够泵出几种不同 的抗生素产生多重耐药性；3）产生耐药酶使抗生素失活。临床上最重要的例子就 是肝内酸胺酶使β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺环裂解；4）通过变异、重组或其 他靶位替换使抗生素靶位发生改变，造成抗生素对靶位的亲和力下降。 近年来针对耐药机理开发的抑制剂主要集中在β-内酰胺酶抑制剂和外排泵抑 制剂。对于β-内酰胺抗生素来说，耐药菌的耐药机制主要是产生β-内酰胺酶使该 类抗生素β-内酰胺环开环而丧失活性。为了对抗此耐药机制，除了直接开发对β -内酰胺酶具有抗性的头抱菌素类抗生素外，另一种方法就是寻找具有β-内酰胺酶 抑制活性而直接抗菌活性微弱的化合物，通过与β-内酰胺抗生素联用达到逆转耐 药性的目的。如临床使用20年仍有效的β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸与β-内酰胺抗 生素阿莫西林联用。然而由于新的β-内酰胺酶的不断出现，至今人们已发现了超 过250种不同类型的β-内酰胺酶，因此迫切需要开发第二代β-内酰胺酶抑制剂。 不过