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1，断头，取脑：断头取脑，生理盐水冲洗 RIPA裂解，冰上操作 2，均浆：匀浆机均浆；冰上放置30min； 样品离心取上清，加loading buffer，煮5min 3，配胶: 分离胶和积层胶 4，上样：微量进样器上样 5，电泳：80V，40min；然后120V，约2-3h 6，转膜：配转移缓冲液，滤纸，NC膜； 110V，90min 7，封闭：脱脂奶粉，室温2h 8，加一抗：4°过夜 9，洗膜 10，加二抗：室温1h， 11，洗膜 12，显色 Western blot实验具体操作步骤 ① ② ③ ④ ⑤ 蛋白酶在细胞破碎时可能会释放出来，其会导致某些蛋白的降解。因此裂解细胞制备蛋白样品时，需要加入蛋白酶抑制剂。蛋白酶在低温下无活性 * 将细胞悬浮于渗透胞溶液中，细胞溶胀而释放出细胞内容物 细菌细胞或组织培养细胞可采用冻融裂解 超声仪可产生超声波，通过切应力来裂解细胞。在剧烈搅拌的状态下产生剪切效果。 应用对象：悬浮细胞 步骤：要进行间歇处理，减轻产生热和泡沫，样品处理应在冰浴中进行。 机械匀浆法：先尽量将组织剪成块，然后加蛋白酶抑制剂的冷匀浆液